C型肝炎ウイルスの遺伝子発現機構

丙型肝炎病毒基因表达机制

基本信息

批准号：
04152025
负责人：
斎藤泉
金额：
$ 1.92万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

C型肝炎ウイルス(HCV)の構造蛋白のプロセシングおよび構造蛋白間の相互作用を肝細胞で検討する実験系を確立するため、HCVの3種の構造遺伝子(コア、エンベロープ、NS1)各々を発現する組換えアデノウイルスを作製した。これらの組換えアデノウイルスはアデノウイルス複製・遺伝子発現に必須なE1A遺伝子を欠失しており、この遺伝子を持続的に発現している293細胞では、野生株アデノウイルスと同等に複製し、細胞は死減する。それ以外の細胞では、SRaプロモーターから目的遺伝子のみを発現し、細胞は生存する。これらの組換えウイルスの力価は10^8〜10^3PFU/mlに達した。これらをそれぞれ293細胞、HeLa細胞およびヒト肝細胞由来HepG2に感染した。その結果この全ての細胞株でほぼ100%の細胞でHCVのコア、エンベロープ、NS1蛋白の発現を確認した。293細胞では組換えウイルスが増殖するため、特に高い発現が得られた。HCVの構造遺伝子を発現する高力価の組換えアデノウイルスが作製された事により、従来は発現が難しかったヒト肝細胞株におけるHCV蛋白のプロセシングや機能解析が今後行えることとなった。現在、エンベロープとNS1蛋白のヒト肝細胞株における同時発現をこの系で行っており、この2種類の蛋白のヘテロ二量体形成について検討を行っている。またこれらの組換えウイルスが生ワクチンとして効果を持つか否かは極めて重要な問題であり、動物実験による抗体産生の検討を合わせて検討している。

三个结构基因的表达（Core，Invelope，NS1），一种实验系统，研究了结构蛋白的加工与肝炎（HCV）与肝细胞的结构蛋白之间的相互作用（Core，Core，Insement，NS1）。。这些重组腺病毒丢失了E1A基因，这对于腺病毒多重和基因表达至关重要，在293个细胞中，该基因持续该基因，与野生储备腺病毒和细胞相同。在其他细胞中，仅靶基因是从SRA启动子表达的，并且细胞存活。这些重组病毒达到10^8-10^3pfu/ml。这些被293个细胞，HeLa细胞和人肝细胞HEPG2感染。结果，几乎100％的这些细胞共享证实了HCV核，包膜和NS1蛋白的表达。在293个细胞中，重组病毒增殖，获得了特别高的表达。表达HCV结构基因的高价腺病毒的产生使得在人肝细胞菌株中处理HCV蛋白处理和功能分析成为可能，以前很难表达。当前，该系统正在执行包膜和NS1蛋白质的人肝囊肿性菌株中同时表达表达，并正在检查两种类型蛋白质的这两种类型的杂质 - 量词形成。这些重组病毒是否作为原始疫苗有效是一个极为重要的问题，我们正在考虑通过动物实验共同生产抗体。