C型肝炎ウイルスの遺伝子発現機構

丙型肝炎病毒基因表达机制

基本信息

批准号：
05152022
负责人：
斎藤泉
金额：
$ 1.54万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05152022/
关键词：
C型肝炎ウイルスアデノウイルスベクタ-生ワクチン

项目摘要

我々は組換えアデノウイルスの作製法に改良を加え、その作製効率を数十倍にすることに成功し、1年間で世界全体の作製数の約3倍に当たる30以上の組換えアデノウイルスを作製した。この技術を用いて、C型肝炎ウイルス(HCV)の3種の構造蛋白(C、E1、E2)のそれぞれ、あるいはこの3種を同時に発現する非増殖型組換えアデノウイルスを作製した。発現のためのプロモ-タ-としては、強力なSRaプロモ-タ-を用いた。これらの組換えアデノウイルスは、ヒト肝癌由来のHepG2細胞株で目的のHCV蛋白を産生し、少なくとも10日は発現が持続することが、特異的モノクロ-ナル抗体を用いたウエスタン法で確認された。さらに、この3種の構造蛋白を同時に発現する組換えウイルスを10^9PFU、マウスに腹腔内接種を行った結果、2回目までの投与で10匹のマウス全例において3種全ての構造蛋白に対する液性抗体の産生を確認した。10^<10>PFU投与したマウスでは、抗体価の上昇は10^9PFU投与群と同等以下であり、また腹膜炎などの症状が現れるなど、副反応である炎症反応が現れた。この結果は、現在ヒトの遺伝子治療に使われ始めている非増殖型アデノウイルスベクタ-にHCVの遺伝子を組み込むことにより、C型肝炎の生ワクチンを開発する可能性を開いたと考えられる。中和抗体が惹起されるか否かについては、チンパンジ-を用いたチャレンジ試験を行う必要があるが、本研究の結果はこのチャレンジ試験への前段階をクリアしたものと考えられる。

我们改善了重组腺病毒的形成方法，成功地提高了其效率几十次，并创造了比整个世界的30倍以上。使用这项技术，一种表达三种结构蛋白（C，E1，E2）或这三种类型的丙型肝炎病毒（HCV）的非传播腺病毒。作为表达的促销-TA，使用了强大的SRA促销-TA-TA。这些重组腺病毒与源自人肝癌的HEPG2细胞量产生了靶标HCV蛋白，并使用特定的单色 - 纳尔抗体证实了这一表达至少10天。此外，10^9 PFU是10^9 PFU的腹内疫苗接种，同时证实了这三个结构蛋白的同时表达。 10^<10> PFU给药小鼠的抗体价格与10^9 PFU给药组相当，并且出现诸如腹膜炎等症状，作为副反应。该结果被认为开放了通过将HCV基因掺入非传播腺病毒载体中的原始丙型肝炎原始疫苗的可能性，该腺病毒载体目前用于人类遗传治疗。关于是否绘制了中等节奏的抗体，必须使用黑猩猩进行挑战测试，但是这项研究的结果已经清除了该挑战测试的上一个阶段。