がんの遺伝子治療をめざしたアデノウイルスベクターの開発

用于癌症基因治疗的腺病毒载体的开发

基本信息

批准号：
07274217
负责人：
斎藤泉
金额：
$ 2.18万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07274217/
关键词：
ウイルスベクター遺伝子治療アデノウイルス組換え酵素Cre

项目摘要

がんの遺伝子治療の方向性としては、現在癌のワクチン療法と自殺遺伝子による方法が検討されている。癌のワクチン療法用のアデノウイルスベクターに関しては、各種サイトカインを発現する組換えアデノウイルスを作製するための効率のよいベクター作製法を既に確立し、共同研究を含め多くの組換え体の作製に成功し、組換えアデノウイルスの多くは理化学研究所の遺伝子バンクに寄託している。また強力なプロモーターの検索の結果から、CAGプロモーターが最も有用性が高いことも明かとし、目的遺伝子組み込み用カセットを改良しCAGプロモーターが組み込まれているコスミドカセットの配布も開始した。この結果当初予定していた目的の大半は達成したため、自殺遺伝子等正常細胞への毒性が懸念される遺伝子を、安全に発現するための発現制御系の確立を目指して研究を遂行した。本研究で開発した『切り出し発現型発現制御系』は、目的遺伝子+PolyAシグナル+プロモーターの両端に部位特異的組換え酵素Creの標的配列であるloxPを有している標的ウイルスとCre発現組換えアデノウイルスを同時感染する系である。CreはloxP配列を特異的に認識して相同組換えをおこし、loxPで挟まれた領域を環状に切り出すことが知られているため、Cre発現ウイルスを感染することで環状分子が生成して始めて発現単位となり得る。この『切り出し発現系』は、Cre感染前の非特異的発現が少なく精度の高い発現制御系であった。この系に自殺遺伝子を組み込み癌細胞でのみ発現するプロモーターと組み合わせることで、がんの遺伝子治療において安全性の高い系が確立されると考えている。

至于癌症遗传治疗的方向，目前正在考虑癌症疫苗治疗和自杀基因的方法。关于用于癌症疫苗疗法的腺病毒载体，我们已经建立了一种有效的载体创建方法，用于创建一种表达各种细胞因子的重组腺病毒，并成功地产生了许多重组，包括许多重组腺病毒。瑞肯。强启动子的结果表明，CAG启动子是最有用的，并且已改进了掺入CAG启动子的宇宙盒，以改善目标遗传掺入盒。结果，实现了大多数最初计划的目的，因此我们进行了研究以建立安全表达基因的表达控制系统，该基因与正常细胞（如自杀基因）有关。本研究中开发的“切割 - 表达表达控制系统”是具有目标病毒的目标病毒，该靶病毒在目标基因+polya信号启动子的两端的零件特异性重组酶CRE是同时感染腺病毒的系统。已知CRE专门识别LOXP序列，创建局部重组，并切出夹在LOXP之间的区域，因此通过感染CRE表达病毒会产生圆形分子。这种“切割表达系统”是一个高度准确的表达控制系统，在CRE感染前几乎没有非特异性表达。我们认为，将在癌症治疗中建立高度安全的系统，通过将自杀基因纳入该系统，仅在癌细胞中表达。