高発現汎用型アデノウイルスベクタ-の開発

高表达通用腺病毒载体的研制

基本信息

批准号：
03670239
负责人：
斎藤泉
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03670239/
关键词：
アデノウイルスウイルスベクタ-組換えウイルス遺伝子治療

项目摘要

1.アデノウイルスベクタ-による遺伝子発現に用いることのできる細胞種・組織型の検討:B型肝炎ウイルス(HBV)遺伝子を組み込んだ組換えアデノウイルスベクタ-(Ad5ーHBL)を13種類の哺乳類細胞株(ヒト・サル・マウス・ラット)に感染し、HB_s抗原の発現を調べた。全ての細胞で発現から認められ、うち11種の細胞で430ー44ng/10^7 cellsの発現が得られた。従って種や組織型を越えた広い範囲での発現が確認された。発現量はHBVプロモ-タ-よりも強力なものを用いることにより大幅な増大を期待している。現在はこの結果を発展させ、極めて強力なSRaプロモ-タ-・EF1aプロモ-タ-を用い、lacZ遺伝子を発現させることにより、発現を青色の発色で定量する系を作製中である。これにより、本ベクタ-による発現法が、どのような細胞組織でどの程度発現できるかを容易に調べることが出来るようになり、本ベクタ-の広い応用範囲(例えば癌・感染症・遺伝病の遺伝子治療など)を具体的に知ることができる。2.組換えウイルス作製法の改良:発現ユニットを挿入するカセットプラズミドに改良を加え、クロ-ン化部位として8塩基認識の酵素Swalを用いることにより、ほとんどあらゆるユニットをウイルスに組み込むことが可能となった。またアデノウイルスゲノムのほぼ全長をコスミドに組み込み、約30kbの間で相同的組換えを起こさせることにより効率よく組換えウイルスを作製する方法は、研究代表者が医科研へ移籍し細胞培養実験が一時中断したために研究が遅れていたが,現在進行中である。スクリ-ニング法については、上記のlacz挿入アデノウイルスと挿入部分を取り替えることにより、pUCと同様のカラ-選択が出来る系を作製中である。これらの進歩により、本ベクタ-は今後汎用され特に遺伝子治療に大きな貢献をすることが期待される。

1。可通过腺病毒载体用于基因表达的细胞规格和组织型检查：13种具有重组腺病毒载体（AD5-HBL）的哺乳动物细胞，并结合了乙型肝炎病毒（HBV）基因猴子大鼠）检查了HB_S抗原的表达。从所有细胞中的表达中识别出它，并在11个细胞中获得了430-44 ng/10^7细胞的表达。因此，确认了物种和组织类型以外的广泛表达。我们预计，通过使用比HBV促销-TA-TA-TA强大的功能，表达能力会大大增加。目前，开发了此结果，并通过使用非常强大的SRA促销-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TA来开发LACZ基因，从而开发了蓝色的表达式。 -ta-ta-ta。结果，可以轻松地检查该载体的哪种细胞组织以及它可以表达多少，以及该矢量的广泛应用范围（例如，癌症，感染或遗传性疾病。遗传处理。 2。重组病毒生产方法的改进：将表达单元插入盒式纤毛中的表达单元，并使用8个碱识别的酶作为黑色调节位点，以便几乎所有单元都可以纳入病毒变成了。此外，通过将腺病毒剂的整体长度纳入宇宙中并导致大约30kb的同性恋重组，从而有效制备重组病毒的方法是，研究代表转移到了医疗机构中，细胞培养实验暂时由于中断而推迟了研究，但目前正在进行中。对于Sukurining方法，可以通过更换上述LACZ插入腺病毒和插入部分来选择与PUC相同颜色的系统。随着这些进展，预计将来该载体将是通用的，并将为遗传治疗做出重大贡献。