がん治療をめざしたアデノウイルスベクターを用いた発現制御法の開発

使用腺病毒载体开发用于癌症治疗的表达控制方法

基本信息

批准号：
12217028
负责人：
斎藤泉
金额：
$ 109.44万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12217028/
关键词：
アデノウイルスベクター guttedベクター部位特異的組換え酵素 Cre loxP FLP FRT 遺伝子治療遺伝子置換反応ウイルスベクター発現制御アデノウイルスウィルスベクター遺伝子置換アデノウィルスレトロウイルスベクターリボザイム

项目摘要

がんの遺伝子治療の実用化に向けて本研究ではがん細胞特異的高度発現機能を有する改良型アデノウイルスベクターとして、がん細胞特異的プロモーターから部位特異的組換え酵素を発現する「制御ユニット」と強力なプロモーターからの目的遺伝子の発現をOFFからONへと制御する「発現標的ユニット」を一つのウイルスベクターに組み込む「単一型特異的高度発現ベクター」作製法の開発を行ってきた。このベクターにはヘルパーウイルス依存型アデノウイルスベクター(guttedベクター)を応用するため、guttedベクターの効率的な作製法の開発が必須であり、部位特異的組換え酵素の遺伝子置換反応を応用した全く新しいベクター作製法の開発に取り組んでいる。一般的に発現効率が劣る細胞特異的プロモーターからの発現量を確保するために、制御ユニットには組換え効率が高いCreの応用が必須であり、ベクター作製にはFLPを応用する必要性が生じたが、FLPは組換え効率がCreと比べ劣るためFLPの改良を行ってきた。本年度はFLPの温度安定型として報告された4アミノ酸変異体FLPeと本研究で我々が新規に合成し作製したFLPeのcodon usageをヒト型化したhFLPeの組換え効率をFLPと詳細に比較した。新たに作製したペプチド抗体を用いた解析からhFLPeのタンパク質量はFLPと比べ数十倍上昇していたことが明らかとなったが、組換え効率はFLPやFLPeとほぼ同程度であり、高度に発現したFLPは細胞への影響を示す可能性が示唆された。しかし本研究で樹立化したFLPやhFLPe発現293細胞は、予想に反してCre発現293細胞よりも高い組換え効率とベクター生成効率を示しており、これらの細胞株を用いることでguttedベクター作製の高効率化が図られるものと考えている。

在这项研究中，作为在这项研究中具有癌细胞特异性表达功能的改进的腺病毒载体，我们从癌细胞特异性启动子中表达了一种特异性重组酶的“控制单元”。创建一个“单个高级高级高表达矢量”，该“表达目标单位”都从强大启动子到一个病毒载体控制目的基因的表达。为了将辅助病毒依赖性腺病毒载体（沟渠载体）应用于该载体，必须有效地开发沟槽的载体，并且特定于特定的重组酶是完全新的新近用于应用遗传替代反应的正在研究矢量制定法律的发展。为了从通常具有较差的表达效率的细胞特异性启动子中获得表达，控制单元需要高重组的CRE应用，并且矢量产生需要应用FLP。克雷。今年，我们比较了据报道的4种氨基酸metartas与FLP进行了比较。使用新创建的肽抗体的分析表明，与FLP相比，HFLPE的蛋白质增加了几十次，但重组效率与FLP和FLPE几乎相同，这表明表达的FLP可能会影响细胞。然而，在这项研究中已经建立的FLP和HFLPE表达293个细胞表明，重组效率和载体的产生效率高于CRE表达293个细胞，并且通过使用这些细胞共享，我们相信这是沟渠的这将是高效的。