G1/S移行におけるRB蛋白質の役割

RB 蛋白在 G1/S 转变中的作用

基本信息

批准号：
07254215
负责人：
田矢洋一
金额：
$ 1.6万
依托单位：
National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07254215/
关键词：
RB蛋白質細胞周期サイクリンD1 Cdk4 Cdk2 サイクリンE サイクリンA p107

项目摘要

RB蛋白質の細胞増殖抑制活性は細胞周期特異的なリン酸化で制御されている。しかし、癌化のメカニズムを考える際に特に重要なGl/S移行期においては、サイクリンD、E、Aをそれぞれ含む少なくとも3種類以上のキナーゼがそのリン酸化に関与すると言われながらも、使い分けの機構などが不明であるので、それを解明することを目的とした。そのために、サイクリンDl/Cdk4、サイクリンE/Cdk2とサイクリンA/Cdk2をそれぞれ精製し、これらの精製キナーゼで多くの種類の合成ペプチドや蛋白質のリン酸化を行い、基質特異性の違いを解析した。一方では、化学合成したリン酸化ペプチドを抗原として、RB蛋白質の特定リン酸化部位のみ認識するモノクローナル抗体の作製を試みた。その結果、サイクリンEやA依存性キナーゼによるリン酸化の共通モチーフはS/T-P-X-K/Rであるが、サイクリンDl/Cdk4のそれは明確に異なり、-2の位置にProを必要とすることがわかった。さらに、RB蛋白質上にはサイクリンDl/Cdk4特異的なリン酸化部位があることを見い出し、その部位を変異させたRB蛋白質も作製した。また、p107がサイクリンDl/Cdk4でリン酸化されることもことも見い出した。一方では、RB蛋白質の807番目のリン酸化セリンを認識するモノクローナル抗体が作製できた。Cdk4特異的なインヒビターであるp16は、多くの癌で失活している癌抑制遺伝子産物でもあるので、p16と同様な活性をもつ低分子物質は癌治療薬になると期待されるが、我々が発見したサイクリンDl/Cdk4の基質特異性は、そうした低分子物質の探索に利用できるはずである。

RB蛋白的细胞增殖抑制活性由细胞周期性磷酸化控制。但是，在GL/S迁移期间，在考虑癌化机理时尤其重要，据说至少有三种激酶（包括细胞周期蛋白D，E和A）参与了磷酸化，但它们被正确使用了由于该机制未知，目的是阐明它。因此，对循环DL/CDK4，细胞周期蛋白E/CDK2和Cyclin A/CDK2进行了完善，这些纯化的激酶进行了多种类型的合成肽和蛋白质磷酸化，并分析了底物特异性的差异。另一方面，我们尝试生产单克隆抗体，仅使用化学合成磷酸化肽作为抗原，仅识别Rb蛋白的特定磷酸化位点。结果，发现由于细胞周期蛋白E和A依赖性激酶引起的磷酸化的常见基序是S/T-P-X-K-K-K-K/R，但在Cyclin dl/cdk4中显然有所不同，并且需要在-2 。此外，发现RB蛋白在RB蛋白上具有特殊的磷酸化位点，并且还制造了该位点突变的RB蛋白。他还发现，P107被Cyclin DL/CDK4磷酸化。另一方面，产生了一种识别RB蛋白的第807磷酸基的单克隆抗体。由于CDK4特异性的Inhyobitter p16也是一种癌症抑制的遗传产物，许多癌症灭活，因此预计具有与p16相同活性的低分子物质将是癌症治疗的。环素DL/CDK4应该可以搜索这种低分子物质。