癌抑制遺伝子産物の生理機能

抑癌基因产物的生理功能

基本信息

批准号：
07272110
负责人：
田矢洋一
金额：
$ 11.07万
依托单位：
National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07272110/
关键词：
RB蛋白質 p53 癌抑制遺伝子サイクリンD Cdk4 Cdkインヒビター mgl-1 ヒトパピローマウィルス

项目摘要

1.酵母のTwo-hybrid系を利用して、HPV16のE6蛋白と複合体を形成する2つの細胞蛋白を得た。1つは、HUMHMCM2(酵母MCM2のヒトホモログ)であり、他の1つは未知の蛋白(約60Kd)であった。2.サイクリンD1-Cdk4が、他のサイクリンEやA依存性キナーゼとは異なったアミノ酸配列の所をリン酸化することを初めて明らかにした。サイクリンD1は癌遺伝子にもなるサイクリンであるので、この発見によって、サイクリンD1が細胞癌化に関与するメカニズムの解明が大きく進展すると期待できる。3.Drosophilaの癌抑制遺伝子l(2)glのマウスホモログmgl-1ならびにmgl-2遺伝子の機能をジーンターゲッティングにより解析した。mgl-1ホモ欠損マウスでは水頭症を呈し、出生後48時間以内に死亡し、組織学的には神経上皮細胞の異常が認められた。一方、mgl-2ホモ欠損マウスは、ほとんどが生殖能力を有する生体となるが、すべて矮小であった。4.p21の変異蛋白を複数作製して精製し、アミノ酸置換されたp21はサイクリンDl/Cdk4複合体に結合するがその酵素活性を阻害できないことを見い出した。この変異p21をp16とともにヒト細胞に発現させると、p16に拮抗的な変異p21の作用が観察された。5.ラットcdc2プロモーターのGl/S境界での活性化に関与するエンハンサーAAGTTACAAATAに結合する蛋白因子cdc2E1とcdc2E2のcDNAを単離した結果、E1はSRE中のCArGbox結合因子をコードし、E2は未知の遺伝子であることがわかった。

1.利用酵母双杂交系统，我们获得了两种细胞蛋白，它们与HPV16的E6蛋白形成复合物。一个是HUMHMCM2（酵母MCM2的人类同源物），另一个是未知蛋白质（大约60Kd）。 2. 我们首次揭示了细胞周期蛋白D1-Cdk4磷酸化与其他细胞周期蛋白E和A依赖性激酶不同的氨基酸序列。由于cyclin D1是一种同时也作为癌基因的细胞周期蛋白，这一发现有望极大地推进cyclin D1参与细胞癌变机制的阐明。 3.通过基因打靶分析果蝇抑癌基因l(2)gl的小鼠同源物mgl-1和mgl-2的功能。缺乏纯合mgl-1的小鼠表现出脑积水并在出生后48小时内死亡，组织学结果显示神经上皮细胞异常。另一方面，大多数mgl-2纯合小鼠虽然具有繁殖能力，但都是侏儒小鼠。 4.我们创建并纯化了多个p21突变蛋白，发现氨基酸取代的p21与细胞周期蛋白D1/Cdk4复合物结合但不能抑制其酶活性。当该突变体p21与p16在人细胞中一起表达时，观察到突变体p21对p16的拮抗作用。 5. 分离与参与大鼠 cdc2 启动子 Gl/S 边界激活的增强子 AAGTTACAATA 结合的蛋白质因子 cdc2E1 和 cdc2E2 的 cDNA，结果发现 E1 在 SRE 中编码 CArGbox 结合因子，并且E2 是未知的。