癌抑制遺伝子産物の生理機能

抑癌基因产物的生理功能

基本信息

批准号：
06280124
负责人：
田矢洋一
金额：
$ 10.56万
依托单位：
National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06280124/
关键词：
RB蛋白質 p53 癌抑制遺伝子サイクリンD Cdk4 Cdkインヒビター mgl-1

项目摘要

RB蛋白質をリン酸化するRBキナーゼについては、サイクリンD1-Cdk4が、他のサイクリンEやA依存性キナーゼとは異なったアミノ酸配列の所をリン酸化することを初めて明らかにした。さらに、RB蛋白質上にはサイクリンD1-Cdk4でリン酸化されるけれども他のサイクリンEやA依存性キナーゼではリン酸化されない部位が存在することも見い出した。サイクリンD1は癌遺伝子にもなるサイクリンであるので、この発見によって、サイクリンD1が細胞癌化に関与するメカニズムの解明が大きく進展すると期待できる。一方では、以前に開発したリン酸化ペプチドの化学合成法を用いて、RB蛋白質上の3ヵ所のリン酸化部位をそれぞれ認識する抗体の作製に成功した。これには、上述のサイクリンD1-Cdk4特異的なリン酸化部位も含まれる。また、接触阻止においてはサイクリンD依存性キナーゼ活性が阻害されるが、その際、サイクリンDとCdk4は複合体を形成しているのに、Cdk4の活性化には必須であるThr^<172>がリン酸化されていないことを見い出した。しかし、この部位をリン酸化する酵素であるCdk活性化キナーゼ(CAK)の活性には大きな変化はなかった。一方、_p27^<kip1>が多量に存在することで、CAKがCdk4を基質として認識するのを阻害し、結果として、接触阻止ではサイクリンD依存性キナーゼの活性化が阻害されていることを明らかにした。p53については、ヒトのp53温度感受性変異株(バリン138)を作製した。この変異株をラット胎児繊維芽細胞に活性化rasとともに導入した細胞では、waf1発現の上昇を経ずにG1停止が起きること、Saos-2に導入した細胞ではG1とG2/Mの2つの時期で停止が起きることが示唆された。また、ショウジョウバエの癌抑制遺伝子の1(2)glのマウスホモログmgl-1遺伝子の機能をジーンターゲッティングにより解析した結果、mgl-1を欠損したマウスでは胎生期の神経上皮細胞の異常増殖が起きることが判明したが、腫瘍の発生は見られなかった。

关于磷酸化 RB 蛋白的 RB 激酶，我们首次揭示了细胞周期蛋白 D1-Cdk4 在与其他细胞周期蛋白 E 和 A 依赖性激酶不同的氨基酸序列上进行磷酸化。此外，我们发现 RB 蛋白上有一个位点被细胞周期蛋白 D1-Cdk4 磷酸化，但不被其他细胞周期蛋白 E 和 A 依赖性激酶磷酸化。由于cyclin D1是一种同时也作为癌基因的细胞周期蛋白，这一发现有望极大地推进cyclin D1参与细胞癌变机制的阐明。另一方面，利用之前开发的磷酸化肽的化学合成方法，他们成功地生产出了能够识别RB蛋白上三个磷酸化位点的抗体。这还包括上面提到的细胞周期蛋白 D1-Cdk4 特异性磷酸化位点。此外，在接触抑制过程中，细胞周期蛋白D依赖性激酶活性受到抑制，但即使细胞周期蛋白D和Cdk4形成复合物，对Cdk4激活至关重要的Thr ^ 172 也被发现未被磷酸化。然而，Cdk 激活激酶 (CAK)（磷酸化该位点的酶）的活性没有显着变化。另一方面，大量 _p27^<kip1> 的存在会抑制 CAK 将 Cdk4 识别为底物，因此，接触抑制会抑制细胞周期蛋白 D 依赖性激酶的激活。关于p53，我们创建了人类p53温度敏感突变株（缬氨酸138）。当将该突变株与激活的ras一起引入大鼠胎儿成纤维细胞时，发生G1停滞，而waf1表达没有增加，并且当细胞被引入Saos-2时，存在两个阶段，G1和G2/M。将会发生停电。此外，我们对果蝇抑癌基因1(2)gl的小鼠同源mgl-1基因的功能进行基因打靶分析，发现缺乏mgl-1的小鼠在胚胎期神经上皮细胞增殖异常。然而，没有观察到肿瘤。