リン酸化によるRB蛋白質とp53の生理機能の制御

磷酸化调节RB蛋白和p53的生理功能

• 批准号: 09254271
• 负责人: 田矢 洋一
• 金额: $ 11.52万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09254271/
• 关键词: RB蛋白質; p53; Cdk4; Cdk2; E2F; カフェイン; ATM; Chk2; サイクリンD1; サイクリンE; ATR; MDM2; アセチル化; RB蛋白質; p53; Cdk4; Cdk2; E2F; カフェイン; ATM; Chk2; サイクリンD1; サイクリンE; ATR; MDM2; アセチル化

G1/S移行期には、サイクリンD1-Cdk4、サイクリンE-Cdk2の順で、少なくと2種類のキナーゼがRB蛋白質のリン酸化を行うと示唆されている。しかし、なぜ何種類ものキナーゼが関与するのかということと、それらがどういうように使い分けされているのかということは、ほとんどわかっていない。本研究はそれを解明することを目的とした。RB蛋白質上には約13ケ所のリン酸化部位があるが、われわれにはこれらの部位を特異的に認識する抗体をほぼすべて作製してきたので、これを積極的に活用した。そして、次の諸点を明らかにした。1)RB蛋白質上のCdk4特異的部位がリン酸化されているとE2F-1との複合体形成が見られないのに対して、Cdk2特異的部位がリン酸化されていても複合体は形成される。 2)RB蛋白質のC末端側には、リン酸化に際してCdk2が先ず結合する部位が存在する。一方、p53上にも約13ケ所のリン酸化部位がある。これらのリン酸化の生理的意義を研究するために、われわれはこれらの部位を特異的に認識する抗体をほぼすべて作製してきた。そして、すでに、Ser15のリン酸化がp53の活性化に重要であることを明らかにしてきたが、他の部位についてもこれらの抗体を用いて意義を明らかにすることを試みた。そして、次の諸点を明らかにした。1)Ser20のリン酸化もp53の活性化に重要であり、かつ、そのリン酸化はDNA傷害や複製のチェックポイントに重要な働きをするChk2とChk1らしい。 2)カフェインが放射線に対する感受性を高めることは以前から知られていたが、これはATMとATRのキナーゼ活性を阻害することによって引き起こすらしいことを明らかにした。 3)p53のSer46のリン酸化がp53によるアポトーシス誘導能を制御していることを見いだした。

已经提出，在G1/s过渡期间，至少两种类型的激酶按Cyclin D1-CDK4和Cyclin E-CDK2的顺序进行RB蛋白进行磷酸化。但是，鲜为人知为什么涉及许多类型的激酶以及如何使用它们的使用方式。这项研究旨在澄清这一点。 RB蛋白上大约有13个磷酸化位点，并且由于我们生产了几乎所有专门识别这些位点的抗体，因此我们已经积极利用它们。他揭示了以下几点：1）RB蛋白上的CDK4特异性位点被磷酸化，也没有观察到与E2F-1的复杂形成，而即使CDK2特异性位点被磷酸化，则形成了复合物。 2）在RB蛋白的C端有一个位点，CDK2在磷酸化过程中首次结合。另一方面，p53上还有大约13个磷酸化位点。为了研究这些磷酸化的生理意义，我们创建了几乎所有专门识别这些位点的抗体。已经揭示了Ser15磷酸化对于p53的激活很重要，但是我们也试图阐明使用这些抗体的其他位点的重要性。他透露了以下几点：1）Ser20磷酸化对于p53的激活也很重要，并且其磷酸化似乎是CHK2和CHK1，它们在DNA损伤和复制检查点中起着重要作用。 2）很长一段时间以来，咖啡因会增加对辐射的敏感性，并且发现这可能是由于抑制ATM和ATR的激酶活性引起的。 3）发现p53的Ser46的磷酸化调节了p53诱导凋亡的能力。