G1/S移行におけるRB蛋白質の役割

RB 蛋白在 G1/S 转变中的作用

基本信息

批准号：
05269229
负责人：
田矢洋一
金额：
$ 1.28万
依托单位：
National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05269229/
关键词：
cdk2 ブチロラクトンI RBキナーゼ G1 S リン酸化ペプチド

项目摘要

癌抑制RB蛋白質のG1/S期におけるリン酸化と、RB蛋白質と結合する未知の蛋白質についての研究を進めた。1)cdk2/cdc2キナーゼに特異的な低分子阻害剤として、萬有製薬との共同研究で世界で初めて発見したブチロラクトンIが、in vivoでは細胞をG1/Sに停止させ、その際、RB蛋白質のリン酸化も阻害されていることを見い出した。1993年の暮には、もう一つの重要な癌抑制蛋白質であるp53の生理機能が米国のグループによって解明された。結局、p53はcdkファミリーキナーゼに結合して阻害する蛋白質Waf1/Cip1の合成を誘導して、細胞をG1/S期に停止させることがわかったが、我々のブチロラクトンIは、Waf1/Cip1と同様の活性をもつものであり、癌治療薬としての可能性が大いに示唆される。15EA03:2)昨年度に開発したリン酸化ペプチド化学合成法を用いて、RB蛋白質上のリン酸化部位のうちの2カ所の部位に相当するリン酸化ペプチドを合成し、それを抗原として抗体を作製した。その一つの抗体はリン酸化型RB蛋白質とのみ反応し、かつ、フォスフォセリンを含む周辺のアミノ酸配列を特異的に認識していることを確認した。こうした、それぞれのリン酸化部位に特異的な抗体を用いれば、細胞周期におけるそれぞれの部位のリン酸化の時期、および、そのリン酸化を行うRBキナーゼの成分種の詳細な解析を行えるはずである。3)癌抑制RB蛋白質に結合する新しい蛋白質としてクローニングしたRBQ-3のcDNAの全一次構造を決めた。そして、コンピューター・サーチの結果、発芽酵母の一本鎖DNA結合蛋白質の遺伝子RPA-1のすぐ3〓に存在する機能未知の蛋白質と有意な相同性を持つことを見い出した。RBQ-3遺伝子はヒト染色体上の1q32にマップされた。 4)核マトリックス蛋白質であるラミンAがin vitroでRB蛋白質と結合することを見いだし出し、さらに、その結合に使われるラミンA蛋白質上の領域を同定した。この発見はRB蛋白質の研究に新たな方向を開く可能性を秘めている。

我们对G1/S期抑癌RB蛋白的磷酸化以及与RB蛋白结合的未知蛋白进行了研究。 1）丁内酯I是与班宇药业联合研究，在全球首次发现的，作为CDK2/CDC2激酶特异性小分子抑制剂，在体内将细胞阻滞于G1/S期，同时抑制RB蛋白还发现磷酸化。 1993年底，美国的一个研究小组阐明了另一种重要的抑癌蛋白p53的生理功能。最后，我们发现p53诱导Waf1/Cip1的合成，这种蛋白质与CDK家族激酶结合并将细胞阻滞在G1/S期，作为癌症治疗剂具有巨大的潜力。 15EA03:2) 利用去年开发的磷酸化肽化学合成方法，我们合成了对应于RB蛋白上两个磷酸化位点的磷酸化肽，并用它们作为抗原来创建抗体。经证实，其中一种抗体仅与磷酸化的RB蛋白反应，并特异性识别周围含有磷酸丝氨酸的氨基酸序列。通过使用这些针对每个磷酸化位点的特异性抗体，应该可以对细胞周期中每个位点的磷酸化时间以及进行磷酸化的 RB 激酶的成分进行详细分析。 3）我们确定了RBQ-3 cDNA的完整一级结构，将其克隆为与肿瘤抑制RB蛋白结合的新蛋白。计算机搜索的结果发现，这种蛋白质与位于芽殖酵母中的单链 DNA 结合蛋白 RPA-1 基因下方的一种功能未知的蛋白质具有显着的同源性。 RBQ-3 基因被定位到人类染色体上的 1q32。 4）我们发现核纤层蛋白A（一种核基质蛋白）在体外与RB蛋白结合，并进一步鉴定了核纤层蛋白A蛋白上用于这种结合的区域。这一发现有可能为 RB 蛋白的研究开辟新的方向。