p53のリン酸化による活性調節機構の解析

p53磷酸化活性调节机制分析

• 批准号: 10044336
• 负责人: 田矢 洋一
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for international Scientific Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10044336/
• 关键词: p53; リン酸化; ATR; ATM; MDM2; アセチル化; p53; リン酸化; ATR; ATM; MDM2; アセチル化

Carol Prives教授とのこの共同研究のために、先ず、p53上の推定されるリン酸化部位(約13カ所)を特異的に認識する抗体をほぼすべて作製した。C末端側の2カ所のアセチル化部位に対する抗体も作製した。p53は普通の細胞ではごく微量しか存在しないけれども、ガンマ線や化学発癌物質などでDNAにダメージを受けると増加してきて、転写活性化能ももつようになる。その際、mRNAは増加しない。そのメカニズムはすでに前年度の共同研究で明らかにしていた。即ち、DNAダメージによってp53のN末端から15番目にあるセリン残基のリン酸化が誘導されて、MDM2蛋白質がp53に結合しなくなり、その結果、安定化されて、転写活性化能も高まることを明らかにした。今年度は、その研究をさらに発展させ、Ataxia telangiectaciaの原因遺伝子であるATM蛋白質がプロテインキナーゼの活性をもち、しかも、p53のSer15を直接にリン酸化することを証明した。ATMのファミリーであるATRについても同様のことを見い出した。さらには、N末端側のSer15,20,33がin vivoでリン酸化されるためには、C末端側にあるテトラマー形成ドメインが必要であることを見つけた。

对于与Carol Prives教授的合作，几乎所有抗体都特别认识了p53（约13个位置）上推定的磷酸化位点。还对C末端的两个乙酰化位点进行了抗体。尽管p53仅存在于正常细胞中，但当DNA受到γ辐射或化学致癌物的破坏时，它也会增加，并且它也具有激活转录的能力。在这种情况下，mRNA不会增加。去年进行的一项联合研究已经阐明了这种机制。也就是说，据揭示了DNA损伤从p53的N末端诱导丝氨酸残基的磷酸化，从而阻止了MDM2蛋白与p53结合，从而导致稳定和提高转录激活能力。今年，我们进一步开发了这项研究，并证明了ATM蛋白（telangiectacia telangiectacia的致病基因）具有蛋白激酶活性，并直接磷酸化p53中的Ser15。 ATR的ATR也发现了同样的ATM。此外，我们发现为N端Ser15,20,33在体内磷酸化，需要位于C端的四聚体形成域。