ALS患者M蛋白及びブチロラクトンIの神経細胞に対する影響の検討

ALS患者M蛋白和丁内酯I对神经细胞影响的检查

• 批准号: 08770467
• 负责人: 荻野 裕
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770467/
• 关键词: Cdc2 キナーゼ; ブチロラクトンI; 脊髄切片培養; 筋萎縮性側索硬化症

当初、Delfsらの方法に準じて旋回培養法を用いて脊髄Organotypic cultureを確立する予定であったが必要機材などの理由で静置界面培養法を選択した。すでにRat海馬について確立されていた培養法をもとに実験を開始した。生後6日のRatより無菌的に脊髄を取出しMcllwain tissue chopperで350μmの厚さにスライスし6穴培養プレートにセットしたテフロン透明多孔膜(Milicell CM)において培養した。培養液はMEM50%、HBSS25%、Heat inactivated horse serum 25%、Glucose 6.5g/lを用い5%CO_2存在下に34度で培養した。培養後14日目の組織を検討したが対照として行った海馬切片では神経細胞の生存がみられたが、脊髄切片はほとんどがグリア細胞で神経細胞の生存が不良であった。胎仔を用いた方が神経細胞の培養に有利と考え胎生16日のRat胎仔を用いて同様の実験を繰り返したがやはり脊髄神経細胞の生存が不良であった。そこで神経栄養因子を加えた培養液を用いてみることにしF12/HAM培地に成長促進物質(プロゲステロン、インスリン等)を添加した培養液を用いて胎生16日胎児脊髄の切片培養を行い14日後において神経細胞が残存していることを確認していた。培養28弐血目の組織を現在病理的に確認中である。これよりこの培養条件で予定していたCdc2 kinase阻害薬ブチロラクトンIの培養脊髄神経細胞への影響の検討を開始するところである。

最初，脊柱器官培养物计划根据DELF和其他方法的方法使用转弯培养方法建立，但是由于必要的设备等原因，选择了静态田间培养方法。基于已经为大鼠海马建立的培养方法开始了实验。脊髓在出生时从大鼠中移开，并将麦克鲁丝组织切碎机切成350μm，并在固定在6孔培养板上的Te​​flon透明多孔膜（Milicell CM）中培养。该培养物为50％的MEM，HBSS 25％，热灭活的马血清25％，葡萄糖6.5g/L和34度的CO_2 5％。在培养后14天检查了该组织，但相反，神经细胞存活，但是大多数脊髓片都是神经胶质细胞，神经细胞的存活率很差。胎儿的使用对于神经细胞培养是有利的，并且在胎儿的16日使用大鼠胎儿重复进行类似的实验，但脊髓神经细胞的存活也很差。因此，我们将使用具有神经营养因子的培养溶液，并使用含有生长物质的培养溶液（孕酮，胰岛素等）对胎儿脊髓进行胎儿脊髓培养确认神经细胞仍然存在。目前，目前正在病理上证实28个血液的组织。由此，我们开始研究Cdc2激酶抑制性药物Buzirolacton I的影响，该药物安排在这些培养条件下，对培养基神经细胞。