成体心筋細胞における新規増殖停止メカニズムの解明

阐明成体心肌细胞的新型生长停滞机制

基本信息

批准号：
11J04516
负责人：
田根将志
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Tottori University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至 2012
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11J04516/
关键词：
成体心筋細胞細胞周期サイクリンD1 CDK

项目摘要

本研究は成体心筋細胞の新規増殖停止メカニズムの解明を目的とする。これまでに薬剤であるタモキシフェン(Tam)の投与により任意の時期で心筋細胞特異的にcyclin D1を発現させることができるマウスを作製し、その詳細を解析してきた。昨年度では、細胞周期のいつの時期にこの再停止が引き起こされたのかを明らかにするため、酵素処理により単一の心筋細胞に解離・固定した後にスライドガラス上に塗抹し、DNAを染色した後に顕微測光を用いてDNA含量の測定を行ったところ、多数の成体心筋細胞がG2期で細胞周期を再停止していることが判明した。さらに、M期への移行に必須なcyclin B1-CDK1の発現や活性化についてウエスタンブロッティングやcyclin B1の免疫沈降産物を用いたヒストンH1キナーゼアッセイにより検証した。この結果、Tam投与によるcyclin D1の発現誘導後にcyclin B1-CDK1の活性が上昇しなかったことから、このことがM期へ移行できない原因であると考えられた。その詳細については、引き続き解析中である。さらに当該年度では、CDK阻害因子p21^<Cip1>ノックアウトマウスの心筋細胞においても心筋細胞特異的cyclin D1誘導発現マウスと同様に、M期移行阻害が引き起こされていることを見出した。p21^<Cip1>欠損心筋細胞では、生後のG1期停止が引き起こされず、過剰に細胞周期が進行する。しかし、M期への移行ができないために、多数の心筋細胞はG2期で細胞周期を再停止したものと考えられた。このことは、(1)このM期移行阻害はcyclin D1誘導発現以外でも確認されたことから、心筋細胞が一般的に獲得する機構であること。(2)M期移行阻害機構は生後の時期から働き始めること。が明らかとなった。

这项研究旨在阐明成年中央细胞的新繁殖停止机理。迄今为止，已经创建了该药物Tamoki SPHE（TAM）的给药，并已随时分析了细胞周期蛋白D1的细节。去年，为了阐明在细胞周期时引起这种悬浮的何时，将其涂在单个心肌细胞上，然后在幻灯片玻璃上涂漆，并在对DNA进行染色后进行测量。使用计量，发现许多成年肌肉细胞在G2项中停止了细胞周期。此外，通过使用Cyclin B1免疫的工业的Western blotting和Histon H1激酶测定法对细胞周期蛋白B1-CDK1的表达和激活是至关重要的。结果，Cyclin B1-CDK1的活性在诱导Cyclin d1表达D1后没有增加，这被认为是无法转移到M时期的原因。细节正在分析中。此外，在财政年度，发现CDK抑制剂p21^<cip1>基因敲除小鼠还引起了障碍物向细胞周期蛋白D1特异性cococinocinocytic Cyclin d1诱导小鼠的迁移。 p21^<cip1>在缺陷的肌肉细胞中，不会引起产后G1相，并且细胞周期过度进展。但是，人们认为，由于无法转移到M时期，大量的心肌细胞在G2项中停止了细胞周期。这是一种通常由心脏细胞获得的机制，因为（1）除了细胞周期蛋白D1诱导表达外，已确认了这种迁移抑制作用。（2）迁移机制M-期限迁移机制应从出生时开始工作。被揭示。