膵β細胞GABA分泌特性の細胞生理学的研究

胰腺β细胞GABA分泌特性的细胞生理研究

基本信息

批准号：
08877006
负责人：
八尾寛
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.マウス膵臓ランゲルハンス島からβ細胞をRorsman & Trube(1986)の方法で単離した。これを小脳培養細胞の細胞体を接触させ、両者にパッチクランプ法を適用した。β細胞に脱分極パルスを与えることにより、Ca^<2+>電流を観察したにも関わらず、小脳培養細胞に GABA誘発電流を認めなかった。2.同様の実験をニスタチン穿孔パッチ法を用いて行ったが、脱分極やグルコース刺激にを与えたときのβ細胞からのGABAの遊離を認めなかった。3.ラット膵臓ランゲルハンス島をサンプリングチューブに集め、遊離されるGABAをHPLC法により定量した。細胞内総GABA量の2.5-6%が浮遊液中に放出された。4.グルコース刺激によるGABA遊離の上昇は認められなかった。5.以上により、グルコース刺激や脱分極により、GABAが放出されない可能性が考えられる。GABAの分泌は他のメカニズムにより制御されていかも知れない。他の可能性として、グルコースや脱分極により分泌されるGABAは、自発的に遊離されるものに比べわずかであることが考えられる。測定精度を上げることにより、以上の可能性を明らかにしていく必要がある。また、GABAの遊離とインシュリンの分泌を比較する必要がある。6.膵α細胞由来の株細胞のαTC6は、GABA_A受容体を発現していることが報告さている(Gaskins et al.1995)。これを単離β細胞と共培養し、密着した細胞どうしから記録することにより、GABAの分泌を捉えることを計画している。

1.通过Rorsman & Trube (1986)的方法从小鼠朗格汉斯胰岛中分离β细胞。使其与培养的小脑细胞的细胞体接触，并对两者应用膜片钳。尽管我们通过对β细胞施加去极化脉冲观察到了Ca ^ 2+ 电流，但我们没有在培养的小脑细胞中观察到GABA诱导的电流。 2.使用制霉菌素穿孔贴片法进行类似的实验，但在去极化或葡萄糖刺激时没有观察到β细胞释放GABA。 3.将大鼠胰岛收集到采样管中，通过HPLC方法对释放的GABA进行定量。细胞内总 GABA 量的 2.5-6% 被释放到悬浮液中。 4.没有观察到由于葡萄糖刺激而导致GABA释放增加。 5. 综上所述，GABA可能由于葡萄糖刺激或去极化而没有释放。 GABA 分泌可能受到其他机制的调节。另一种可能性是，通过葡萄糖或去极化分泌的 GABA 量与自发释放的量相比较小。有必要通过提高测量精度来澄清上述可能性。还需要比较 GABA 释放和胰岛素分泌。 6. 据报道，αTC6 是一种源自胰腺 α 细胞的细胞系，可表达 GABA_A 受体（Gaskins 等，1995）。我们计划通过与分离的 β 细胞共培养并记录彼此紧密接触的细胞来捕获 GABA 的分泌。