海馬シナプス前終末におけるPKC増強メカニズムの素過程解析

海马突触前末梢PKC增强机制的基本过程分析

基本信息

批准号：
13041003
负责人：
八尾寛
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度に引き続き,海馬CA3領域の苔状線維シナプス前終末の各々において,Ca^<2+>チャネルサブタイプの分布が異なるとする仮設を検証した。Ca^<2+>感受性蛍光デキストランをCa^<2+>非感受性蛍光デキストランと同時に苔状線維終末に取り込ませた。共焦点顕微鏡下にCa^<2+>非感受性蛍光デキストランにより単一苔状線維シナプス前終末を同定した。緩衝能の弱いSr^<2+>で細胞外Ca^<2+>を置き換えて,活動電位にともなう細胞内Sr^<2+>濃度応答をCa^<2+>感受性蛍光デキストランで測定した.Ca^<2+>感受性蛍光デキストランとしてOregon Green 488 BAPTA-1デキストランを用い,Sr^<2+>に対する感受性を計測し,解離定数値(K_D)は3.18μMであった。Ca^<2+>チャネルサブタイプ特異的なアンタゴニストについて,それぞれのサブタイプ特異的に作用する最大効果濃度を検討し,ω-agatoxin IVA(P/Qタイプ)0.5μM,ω-conotoxin GVIA(Nタイプ)1μM, SNX-482(Rタイプ)1μMを得た。これらはそれぞれのサブタイプをほぼ完全に抑制するにもかかわらず,ω-agatoxin IVA, ω-conotoxin GVIA, SNX-482のすべてに非感受性のSr^<2+>濃度応答がみとめられ,これはLタイプ特異的なBay K 8644により促進された。単一シナプス前終末のあるものには,P/Q, N, R, Lのすべてが分布していたが,P/QとLのみが分布しているものも認められ,サブタイプの分布は終末ごとに大きく異なることが明らかになった。苔状線維を含む海馬神経回路機能の可塑性において,シナプス前終末個々において固有のCa^<2+>チャネルサブタイプの分布を有していることが重要な役割を果たしていることが示唆される。

继续前一年，我们检验了海马CA3区各苔藓纤维突触前末端Ca^2+通道亚型分布不同的假设。将Ca 2+ 敏感的荧光右旋糖酐与Ca 2+ 不敏感的荧光右旋糖酐同时掺入苔藓纤维末端。在共焦显微镜下使用Ca 2+ 不敏感荧光右旋糖酐鉴定单苔藓纤维突触前末端。我们用缓冲能力较弱的Sr^<2+>代替细胞外Ca^<2+>，并使用Ca^<2+>敏感荧光测量与动作电位相关的细胞内Sr^<2+>浓度响应。葡聚糖。Oregon Green 488，Ca^2+-敏感荧光葡聚糖。使用BAPTA-1葡聚糖测定对Sr 2+ 的敏感性，解离常数值(K_D)为3.18μM。对于Ca^2+通道亚型特异性拮抗剂，我们研究了对每种亚型特异性作用的最大有效浓度，发现ω-雷蛇毒素IVA（P/Q型）0.5μM、ω-芋螺毒素GVIA（N型） 1μM，SNX-482（R型）1μM。尽管这些亚型几乎完全抑制每种亚型，但对于L型特异性Bay K 8644促进的所有ω-雷加毒素IVA、ω-芋螺毒素GVIA和SNX-482观察到不敏感的Sr^2+浓度响应。有的单个突触前末梢全部为P/Q、N、R、L分布，但有的则只有P/Q和L分布，而且亚型的分布很明显，每个末梢都有很大不同。这表明Ca ^ 2+ 通道亚型在每个突触前末梢的独特分布在包括苔藓纤维的海马神经回路的功能可塑性中起着重要作用。