Csk類似Chkチロシンキナーゼによる細胞増殖制御機構の解析

Csk样Chk酪氨酸激酶的细胞增殖调控机制分析

基本信息

批准号：
11139254
负责人：
山口直人
金额：
$ 2.75万
依托单位：
University of Shizuoka
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Src型チロシンキナーゼの酵素活性は、増殖因子などの刺激によって活性上昇を起こし、C-terminal Src kinase(Csk)により抑制的に調節される。発癌遺伝子産物V-Srcは、Src型チロシンキナーゼの変異体であり、恒常的キナーゼ活性化を示す。Src型キナーゼとその活性制御機構は多細胞生物特有であり、ヒトなどの哺乳類動物細胞で研究を進めることは制癌に重要である。我々はCsk homologous kinase(Chk)がSrc抑制性チロシンキナーゼCskとファミリーを形成すること、膜結合型Chkを介したLynキナーゼ選択的Src型キナーゼ抑制機構の存在を明らかにした。Chk恒常的過剰発現が血液系細胞の増殖遅延と多核化を誘導すること、LynとChkが染色体や紡錘糸にも会合し、染色体の動態に関与することが示唆された。今回、上皮系癌細胞株HeLaやCOS-1細胞でもLynが核内に存在することを見いだした。ChkをCOS-1細胞に遺伝子導入すると、細胞質と核にも発現した。SH2領域欠失Chk変異体は核に局在し、多形核化・多核化を誘導して増殖を抑制した。Lynキナーゼ領域欠失変異体をCOS-1細胞やHeLa細胞に遺伝子導入すると、核での高い発現が認められ、多核化・増殖の遅延が見られた。したがって、COS-1細胞やHeLa細胞においても、Chk過剰発現血液系細胞株と類似した多形核・多核化が起こることが分かった。Src型キナーゼが分裂期染色体の動態に重要な役割をもち、染色体と紡錘糸のチロシンリン酸化の変動が、核の分裂に影響を与えている可能性が考えられる。

SRC型酪氨酸激酶的酶活性通过诸如生长因子之类的刺激增加，并受到C末端SRC激酶（CSK）的抑制作用。致癌基因产物V-SRC是SRC型酪氨酸激酶的突变体，并表现出组成型激酶活化。 SRC型激酶及其活性调节机制是多细胞生物独有的，对于预防癌症来说，对哺乳动物细胞（如人类）进行研究很重要。我们已经透露，CSK同源激酶（CHK）形成了一个具有SRC抑制性酪氨酸激酶CSK的家族，并且存在膜结合的CHK CHK介导的LYN激酶抑制性SRC抑制性激酶抑制机制。据建议，构型CHK的过表达会诱导血细胞的延迟增殖和多核，并且Lyn和Chk还与染色体和纺锤体纤维相关，并且它们参与染色体动力学。在本文中，我们发现Lyn也存在于上皮癌细胞系HELA和COS-1细胞中的细胞核中。将CHK转染到COS-1细胞中使其在细胞质和核中表达。 SH2区域的CHK突变体缺失定位于核，诱导多形核化和多核化以抑制增殖。当将LYN激酶区缺失突变体引入COS-1和HeLa细胞时，在细胞核中观察到高表达，并观察到多核和增殖。因此，发现在COS-1和HELA细胞中也出现了类似于过表达CHK的血细胞系的多形核和多核化。 SRC型激酶可能在有丝分裂染色体的动力学中起重要作用，并且染色体和纺锤纤维的酪氨酸磷酸化的变化可能会影响核分裂。