血液幹細胞特異抗原、tieとCD34を介するシグナル伝達機構

造血干细胞特异性抗原、Tie和CD34介导的信号转导机制

基本信息

批准号：
05670919
负责人：
山口直人
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670919/
关键词：
血液幹細胞 tie CD34 シグナル伝達

项目摘要

血液幹細胞表面に発現する抗原蛋白の構造から、細胞質ドメインにチロシンリン酸化酵素を持つものとチロシンリン酸化酵素の構造は持たないが細胞質ドメインはセリン残基がリン酸化されるものとがあることが明かにされてきた。本研究では、それら特異的抗原のうちで、後者のタイプであり細胞接着を介したシグナル伝達に関与することが推測されているCD34分子と、前者のタイプの受容体型チロシンリン酸化酵素であるc-tie分子それぞれの造血における役割を明らかにする目的で実験を行った。まず、CD34分子が細胞接着を介して造血に関与するのかを調べた。CD34に対する単クローン抗体4A1を作製し、ストローマ細胞とCD34陽性細胞との共培養系に4A1抗体を添加すると造血抑制が起こった。さらに、幹細胞系細胞株よりCD34分子を精製して骨髄単核細胞の培養系に添加すると、コロニー形成が抑制された。従って、造血の場において、CD34分子はストローマ細胞と血液幹細胞との相互作用に関係していることが明かとなった。次に、相互作用する分子の検索のために、CD34分子の細胞外領域とIgG1定常部位とのキメラ遺伝子を作製し、キメラ遺伝子安定導入細胞を作製した。培養上清からキメラ蛋白を精製し結合試験を行ったところ、キメラ蛋白に特異的に結合するストローマ細胞蛋白質を見いだした。現在、その分子の同定を急ぐとともにCD34を介するシグナル伝達に関わるかどうか検討している。c-tieに関しては、リガンドを明らかにするためにc-tieの細胞外領域とIgG1定常部位とのキメラ遺伝子を作製した。今後FACSなどを用いて、リガンドとの結合を検討する予定である。以上、CD34及びc-tie分子に対するリガンドが明らかとなれば、リガンド結合によりそれぞれの細胞質内ドメインにphysical associationする蛋白質を同定できシグナル伝達経路が判明するので、幹細胞のシグナル伝達経路の解明にはリガンドの同定が最も重要なポイントとなろう。

从在血液干细胞表面表达的抗原蛋白的结构，细胞质结构域具有酪氨酸氧化物酶，并且可以通过磷酸化的细胞质结构域引起酪氨酸氧化物的结构。在这项研究中，假定参与后一种抗原的CD34分子参与了通过细胞粘合剂进行信号传递，而前者类型的受体酪氨酸氧化物C. -TIE分子进行了一个实验，以阐明血肿的作用。首先，我们检查了CD34分子是否通过细胞粘附参与造血。为CD34创建了一种单克隆抗体4A1，并在疏离细胞和CD34阳性细胞之间的CO培养系统中添加了4A1抗体。此外，当CD34分子从基于干细胞的细胞库存中纯化并添加到骨髓单块核细胞的培养系统中时，菌落被抑制。因此，发现CD34分子与造血位置中基质细胞和血干细胞之间的相互作用有关。接下来，为了搜索相互作用分子，产生了CD34分子分子的外部区域之间的嵌合基因，并产生了IgG1常数部分，并产生了嵌合基因稳定细胞。当从培养物上清液中完善嵌合蛋白并进行了组合测试时，我们发现了一个特异性结合与嵌合蛋白的基质细胞蛋白。当前，我们正在考虑是否会通过CD34参与信号，以急于识别分子。关于C-TIE，创建了C-TIE细胞外区域和IgG1陡峭部分之间的嵌合体基因以阐明配体。将来，我们计划考虑使用FACS与配体结合。 If the ligand to the CD34 and C-Tie molecules is revealed, the ligand binding will determine the signal transmission route because the protein to be PHYSICAL ASSSOCIATIATITIATITIATITIATITIATITIATITIATITITITITITITITITITITITITITITITITITITITITITITITITITITITITITITITITITITITITITITITIT. Identification is the most important point.