血液幹細胞特異抗原、tieとCD34を介するシグナル伝達機構

造血干细胞特异性抗原、Tie和CD34介导的信号转导机制

基本信息

批准号：
05670919
负责人：
山口直人
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670919/
关键词：
血液幹細胞 tie CD34 シグナル伝達

项目摘要

血液幹細胞表面に発現する抗原蛋白の構造から、細胞質ドメインにチロシンリン酸化酵素を持つものとチロシンリン酸化酵素の構造は持たないが細胞質ドメインはセリン残基がリン酸化されるものとがあることが明かにされてきた。本研究では、それら特異的抗原のうちで、後者のタイプであり細胞接着を介したシグナル伝達に関与することが推測されているCD34分子と、前者のタイプの受容体型チロシンリン酸化酵素であるc-tie分子それぞれの造血における役割を明らかにする目的で実験を行った。まず、CD34分子が細胞接着を介して造血に関与するのかを調べた。CD34に対する単クローン抗体4A1を作製し、ストローマ細胞とCD34陽性細胞との共培養系に4A1抗体を添加すると造血抑制が起こった。さらに、幹細胞系細胞株よりCD34分子を精製して骨髄単核細胞の培養系に添加すると、コロニー形成が抑制された。従って、造血の場において、CD34分子はストローマ細胞と血液幹細胞との相互作用に関係していることが明かとなった。次に、相互作用する分子の検索のために、CD34分子の細胞外領域とIgG1定常部位とのキメラ遺伝子を作製し、キメラ遺伝子安定導入細胞を作製した。培養上清からキメラ蛋白を精製し結合試験を行ったところ、キメラ蛋白に特異的に結合するストローマ細胞蛋白質を見いだした。現在、その分子の同定を急ぐとともにCD34を介するシグナル伝達に関わるかどうか検討している。c-tieに関しては、リガンドを明らかにするためにc-tieの細胞外領域とIgG1定常部位とのキメラ遺伝子を作製した。今後FACSなどを用いて、リガンドとの結合を検討する予定である。以上、CD34及びc-tie分子に対するリガンドが明らかとなれば、リガンド結合によりそれぞれの細胞質内ドメインにphysical associationする蛋白質を同定できシグナル伝達経路が判明するので、幹細胞のシグナル伝達経路の解明にはリガンドの同定が最も重要なポイントとなろう。

在血管细胞表面表达的抗原蛋白的结构已表明，有些在细胞质结构域中有些具有酪氨酸磷酸化酶，而有些则没有酪氨酸磷酸化酶，但是细胞质结构域与丝氨酸残基磷酸化。在这项研究中，我们进行了实验，以阐明CD34分子的作用，CD34分子是后一种类型的，并且被怀疑通过细胞粘附参与信号传导，而C-TIE分子是一种前者类型的受体型酪氨酸酪氨酸磷酸化酶的受体型酪氨酸磷酸化酶。首先，我们研究了CD34分子是否通过细胞粘附参与造血。制备了针对CD34的单克隆抗体4A1，并将4A1抗体添加到基质细胞和CD34阳性细胞的共培养系统中导致造血抑制。此外，当从干细胞系细胞系中纯化CD34分子并添加到骨髓单核细胞的培养系统中时，抑制了菌落形成。因此，已经揭示了在造血部位，CD34分子与基质细胞与血干细胞之间的相互作用有关。接下来，为了搜索相互作用的分子，生成了CD34分子和IgG1常数位点之间的嵌合基因，并产生了嵌合基因稳定的细胞。从培养的上清液中纯化嵌合蛋白并进行结合测试，并发现特异性结合与嵌合蛋白的基质细胞蛋白。目前，我们急于确定该分子，并正在研究它是否通过CD34参与信号。对于C-TIE，在C-TIE的细胞外区域和IgG1常数位点之间产生嵌合基因，以阐明配体。将来，我们计划使用FACS等调查与配体的结合。一旦发现了CD34和C-TIE分子的配体，配体结合就可以使配体结合识别蛋白质，这些蛋白质在其各自的细胞质结构域中物理相关，并可以确定信号传导途径，因此鉴定配体在阐明茎细胞的信号传导途径方面将是最重要的一点。