CSK類似chkチロシンキナーゼによる細胞増殖制御機構の解析

CSK样chk酪氨酸激酶的细胞增殖调控机制分析

基本信息

批准号：
10152248
负责人：
山口直人
金额：
$ 2.56万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Src型チロシンキナーゼの酵素活性は、増殖因子などの刺激によって一過性の活性上昇を起こし、C-terminal Srckinase(Csk)により抑制的に調節される。発癌遺伝子産物として知られているSrc型キナーゼの変異体は、抑制調節を全く受けずに恒常的活性化を示す。Src型キナーゼとその活性制御機構は多細胞生物特有である。ヒトなどの哺乳動物細胞でのSrc型キナーゼの機能を研究することは、制癌においてとても重要である。我々は、Cskhomologous kinase(Chk)がCskとファミリーを形成すること、膜結合型Chkを介したLynキナーゼ選択的Src型キナーゼ制御機構の存在を明らかにしてきた。本研究では、Chkを恒常的過剰発現したKMT-2血液系細胞で見られる増殖の遅延・多核化を調べるために、生きたままの分裂期の細胞を微分干渉光学系顕微鏡下で経時的に観察した。染色体整列が不完全である細胞が多く見られた。さらに、多数の不均衡染色体分配を起こしたときに、疑似細胞質分裂を経由した細胞質分裂不全が誘発され、細胞の多核化形成の決定的瞬間を初めて観察することができた。Src型キナーゼLyn・pp64およびChk・Cskが分裂期染色体と分裂期紡錘糸に強固に会合していた。Chk過剰発現によりLynの自己リン酸化の減少を伴うpp64のチロシンリン酸化の亢進が見られ、紡錘糸の形成ががなり抑制されていた。Src型キナーゼとその調節因子が分裂期染色体の動態に重要な役割をもつものと考えられる。したがって、染色体と紡錘糸上に存在するSrc型キナーゼとその制御機構の平衡の傾きによるチロシンリン酸化の変動が、紡錘糸形成を通して染色体の動態に影響を与えている可能性が考えられる。

Src型酪氨酸激酶的酶活性在受到生长因子等刺激时会导致活性短暂增加，并受到C末端Srckinase (Csk)的抑制性调节。突变的 Src 型激酶，已知是癌基因产物，表现出组成型激活，没有任何抑制性调节。 Src 型激酶及其活性控制机制是多细胞生物所独有的。研究Src型激酶在人类等哺乳动物细胞中的功能对于预防癌症非常重要。我们发现Csk同源激酶（Chk）与Csk组成一个家族，并且存在由膜结合Chk介导的Lyn激酶选择性Src型激酶调节机制。在本研究中，为了研究在组成型过表达Chk的KMT-2血细胞中观察到的延迟增殖和多核，我们在微分干涉光学显微镜下观察了活的有丝分裂细胞随时间的变化。许多细胞的染色体排列不完整。此外，当大量不平衡的染色体分离发生时，通过假细胞分裂诱导胞质分裂失败，我们首次观察到细胞多核的决定性时刻。 Src 型激酶 Lyn/pp64 和 Chk/Csk 与有丝分裂染色体和有丝分裂纺锤体纤维紧密相关。 Chk 过表达增加了 pp64 的酪氨酸磷酸化，同时减少了 Lyn 的自身磷酸化，纺锤体纤维的形成受到抑制。 Src 型激酶及其调节因子被认为在有丝分裂染色体的动力学中发挥重要作用。因此，由于染色体和纺锤体纤维上存在的Src型激酶之间的平衡倾斜而导致酪氨酸磷酸化的波动及其调节机制可能通过纺锤体纤维的形成影响染色体动力学。