Chkチロシンキナーゼによる細胞増殖制御機構の解析

Chk酪氨酸激酶细胞增殖调控机制分析

基本信息

批准号：
12215127
负责人：
山口直人
金额：
$ 2.82万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

発癌ウイルスがもつSrc型チロシンリン酸化酵素(v-Srcやv-Yes)は、キナーゼ活性調節領域に遺伝子変異をもち、恒常的キナーゼ活性化を起こし細胞を癌化へと導く。様々な組織・細胞種に多重発現する癌原遺伝子産物Src型チロシンキナーゼ群(c-Src・c-Yes・c-Fgr・Lyn・Fyn・Hck・Lck・Blk)は、組織遍在発現性をもつCskチロシンキナーゼ(C-terminal Src kinase)によりチロシンリン酸化を受けて、活性が抑制的に制御されている。Src型キナーゼとその活性制御機構は多細胞生物特有であり、ヒトなどの哺乳動物細胞で機能制御の研究を進めることは癌研究において重要である。我々は、Csk homologous kinase(Chk)がSrc抑制性チロシンキナーゼCskとファミリーを形成すること、膜結合型Chkを介したLynキナーゼ選択的Src型キナーゼ抑制機構の存在を明らかにしてきた。Chk恒常的過剰発現が血液系細胞の増殖遅延と多核化を誘導すること、LynとChkが染色体や紡錘糸にも会合し、染色体の動態に関与することが示唆された。今回、上皮系癌細胞株HeLaやCOS-1細胞でもLynが核内に存在することを見いだした。alkをCOS-1細胞に遺伝子導入して大量発現させると、細胞質と核にも発現した。一方、SH2領域欠失Chk変異体は核に局在し、多形核化分葉核化・多核化を誘導して増殖を抑制した。Lynキナーゼ領域欠失変異体をCOS-1細胞やHeLa細胞に遺伝子導入すると、核での発現が認められ、Chk過剰発現血液系細胞株と類似した多核化が起こることが分かった。Src型チロシンキナーゼLynの細胞核分裂と染色体の動態への役割が推察される。

致癌病毒所拥有的Src型酪氨酸激酶（v-Src和v-Yes）在激酶活性调节区发生基因突变，引起组成型激酶激活并导致细胞癌变。原癌基因产物Src型酪氨酸激酶群（c-Src、c-Yes、c-Fgr、Lyn、Fyn、Hck、Lck和Blk）在多种组织和细胞类型中大量表达，普遍表达在组织中，其活性受到 Csk 酪氨酸激酶（C 端 Src 激酶）酪氨酸磷酸化的抑制和调节。 Src 型激酶及其活性控制机制是多细胞生物所独有的，研究它们在人类等哺乳动物细胞中的功能调节对于癌症研究非常重要。我们发现，Csk 同源激酶 (Chk) 与 Src 抑制性酪氨酸激酶 Csk 形成一个家族，并且存在由膜结合 Chk 介导的 Lyn 激酶选择性 Src 型激酶抑制机制。有人认为，Chk 的组成型过表达会导致血细胞生长迟缓和多核，并且 Lyn 和 Chk 还与染色体和纺锤体纤维相关，并参与染色体动力学。在这项研究中，我们发现 Lyn 也存在于上皮癌细胞系 HeLa 和 COS-1 细胞的细胞核中。当alk基因导入COS-1细胞并大量表达后，其细胞质和细胞核中也表达。另一方面，SH2区域缺失的Chk突变体定位于细胞核，诱导多形核化、分叶成核和多核化，并抑制增殖。当将 Lyn 激酶结构域缺失突变体引入 COS-1 细胞或 HeLa 细胞时，观察到核表达，并发生与 Chk 过表达血细胞系类似的多核现象。推测Src型酪氨酸激酶Lyn在细胞核分裂和染色体动力学中发挥作用。