新Cskファミリー「Hylチロシンキナーゼ」による細胞分裂異常の分子機構

Csk新家族“Hyl酪氨酸激酶”引起细胞异常分裂的分子机制

基本信息

批准号：
07273255
负责人：
山口直人
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07273255/
关键词：
チロシンキナーゼ Hyl Src型キナーゼ Csk 細胞分裂染色体分配多核化

项目摘要

ヒト細胞でのSrc型キナーゼの細胞分裂における制御機構を明らかにするために、Cskとファミリーを形成するHylの機能解析をおこなった。 1.我々が単離したHylチロシンキナーゼは、Src型チロシンキナーゼの抑制的制御作用を持つCskと構造上きわめて類似しているが、血液細胞と脳でのみHylとCskの両者の発現があり、他の細胞種では、Cskの発現しか認められない。単クローン性抗体を作製してHylの細胞内局在を調べたところ、血小板では主に膜画分に、COS細胞を用いた一過性発現では核内にも局在し、細胞質内に主に存在しているCskと機能的差異が予想された。 2.Hylの機能を調べるために、ヒト血液細胞株KMT-2にHylを恒常的過剰発現させた。得られた全てのクローンは染色体数の増加と多核化を起こし、分裂期での染色体整列・分配の異常および細胞質分裂抑制と多核化細胞の3次元的分裂を示した。 3.Hyl過剰発現細胞において、Src型キナーゼのうち、Lynに選択的な自己リン酸化の抑制が認められ、自己リン酸化抑制はLynの酵素活性を上昇させた。Hyl過剰発現により、複数の蛋白のチロシンリン酸化の亢進が起こり、特に、分裂期特異的に出現するチロシンリン酸化蛋白p65を見い出した。このp65が細胞質分裂抑制に重要な働きをしていることが考えられる。 4.Hyl遺伝子欠損マウスを作製した。生まれてきたマウスの外見は一応正常であり、成熟細胞のエフェクター機能についての詳細な検討が必要である。Hylはin vitroでは、Cskと同様に、Src型キナーゼのC末端チロシンをリン酸化するが、本研究で示したように、in vivoで、細胞内局在およびSrc型キナーゼ制御機構の相違・Hyl過剰発現による表現形から、HylとCskの役割分担を予想させる。今後、Hylの基質およびp65の同定などを行い、細胞分裂制御機構を明らかにしてゆく予定である。

为了阐明人类细胞中SRC型激酶细胞分裂的控制机制，对CSK和家族进行了HYL功能分析。 1。我们分离的Hyl酪氨酸激酶与CSK非常相似，CSK具有对SRC型酪氨酸激酶的抑制作用，但仅在其他细胞类型中具有血细胞和大脑的表达。 CSK的表达被识别。当产生单个抗体并检查Hyl的内部区域时，血小板主要位于细胞核中，主要是在血小板中，使用COS细胞和细胞质中的瞬时表达。预计存在。 2。为了检查HYL的功能，Hyl在人体血细胞KMT-2中不断过表达。所有获得的克隆都增加了染色体和多核的数量，表明在分裂期间染色体比对和分布异常，多边细胞的三维分裂。 3. Hyl的过度溶性细胞在SRC型激酶中具有选择性抑制自氧化，而自我氧化的抑制增加了LYN的酶活性。 Hyl过量产生导致多种蛋白质的酪氨酸氧化增加，尤其是发现了在分裂期间出现的酪氨酸氧化物p65。可以想象，该p65在抑制细胞质分裂中具有重要作用。 4。制备Hyl基因缺陷小鼠。出生的小鼠的出现是正常的，需要对成熟细胞的效应子功能进行详细检查。与CSK一样，Hyl具有SRC型激酶C末端C酪氨酸的磷酸化，但是如本研究所示，在体内，内部和SRC型激酶控制机制和HYL的差异预测了HYL和CSK的作用。从表达式形式过表达。将来，将确定HYL底物和p65，并将揭示细胞分裂控制机制。