非受容体型チロシンキナーゼHylとCskの機能分担と血小板活性化

非受体酪氨酸激酶 Hyl 和 Csk 的功能共享与血小板激活

基本信息

批准号：
08671241
负责人：
山口直人
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Src型キナーゼの活性はCskによって常に抑制的に調節されている。我々は、Cskと高い相同性をもつHylを単離し、ゲノム構造の解析からCskとファミリーを形成することを明らかにしてきた。また最近、HylはCsk homologous kinase (Chk)へと名称が変更された。本研究では、ヒト血小板を用いて、Src型キナーゼ活性制御機構を調べることを目的とした。血小板におけるChkとCskの細胞内局在の解析から、Chkは、Cskと同様に膜結合モチーフを持たないにも拘わらず、膜画分に局在し、Csk細胞質局在と対比された。Chkは幾つかの細胞膜貫通蛋白との会合を示した。そして、Chk-膜蛋白複合体はCD36-Lyn複合体の近傍に局在し、化学架橋剤を用いた実験から、ChkはCD36と緩やかな相互作用をもつことが予測された。一方、CskとCD36との会合は見られなかった。トロンビン刺激により、Chkは細胞骨格画分へと迅速に移行するが、Cskは局在を殆ど変化させなかった。CD36-Lyn複合体近傍からのChkの迅速かつ完全な消失は、LynのC末端チロシン残基のリン酸化の著しい減弱を惹起した。そして、Lynは酵素活性の上昇を起こした後、シグナルを伝達するために細胞骨格画分へと徐々に移行した。LynのC末端チロシン残基の脱リン酸化反応は、Chkの細胞骨格画分への迅速な移行が引き金になっていると推測される。血小板におけるSrc型キナーゼのなかで、c-Srcは最も発現量が多いが、CD36とは会合しない。刺激後のc-SrcのC末端チロシンリン酸化状態変化とそれに伴う活性変動は一過性であり、Chkの細胞局在変化と呼応しなかったので、c-Srcの活性はCskによって制御されていると考えられる。しがたって、ChkとCsk共に発現している血小板において、ChkとCskはSrc型キナーゼに対する役割分担を示すことが分かった。

Src 型激酶的活性始终受到 Csk 的抑制性调节。我们分离出了与Csk具有高度同源性的Hyl，并分析了其基因组结构，发现它与Csk组成一个家族。最近，Hyl 已更名为 Csk 同源激酶 (Chk)。在本研究中，我们旨在利用人血小板研究 Src 型激酶活性的调节机制。对血小板中 Chk 和 Csk 的细胞内定位的分析表明，Chk 与 Csk 一样不具有膜结合基序，但定位于膜部分，这与 Csk 的细胞质定位相反。 Chk 已显示与多种细胞跨膜蛋白相关。 Chk-膜蛋白复合物位于CD36-Lyn复合物附近，使用化学交联剂的实验预测Chk与CD36具有松散的相互作用。另一方面，没有观察到 Csk 和 CD36 之间的关联。在凝血酶刺激后，Chk 迅速迁移到细胞骨架部分，而 Csk 几乎不改变其定位。 Chk 从 CD36-Lyn 复合物附近快速完全消失导致 Lyn C 端酪氨酸残基磷酸化显着减弱。 Lyn引起酶活性增加后，逐渐迁移到细胞骨架区室传递信号。推测Lyn的C末端酪氨酸残基的去磷酸化反应是由Chk快速转移至细胞骨架部分而引发的。血小板中的Src型激酶中，c-Src表达最多，但与CD36无关。 c-Src C 端酪氨酸磷酸化状态的变化以及刺激后相关的活性波动是短暂的，并且与 Chk 细胞定位的变化不对应，表明 c-Src 的活性不受 Csk 调节。认为有。因此，发现在Chk和Csk均表达的血小板中，Chk和Csk共享与Src型激酶相关的作用。