新たに発見された活性型L1レトロトランスポゾンの実験病理学への応用

新发现的激活L1逆转录转座子在实验病理学中的应用

基本信息

批准号：
14657055
负责人：
樋口京一
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657055/
关键词：
レトロトランスポゾンラット L1 突然変異 Chediak-Higashi症候群 Lyst ベージュラット

项目摘要

ラットのlysosomal trafficking regulator(Lyst)遺伝子内に存在するL1bレトロトランスポゾンに関して以下の知見を得た。1.L1bを哺乳動物発現ベクターpCEP4中にクローニングし、培養HeLa細胞にトランスフェクトして、転移の生じたG418耐性コロニーを多数得た。L1bの転移挿入先の遺伝子の3'RACE法による同定を試みた。しかしながら、全クローンコロニーにおいてL1b内の同一部位を利用したpoly A化が生じており、遺伝子の同定には至らなかった。そこでL1bとG418耐性マーカー遺伝子との間にスプライスドナーを挿入した新たな発現コンストラクトを作製し、同様の検討を行なっている。2.無細胞蛋白合成系によるL1bのORF1およびORF2産物の大量調製を試みた。ベクターとしてpET-21aを使用したが、蛋白質合成は認められなかった。そこで無細胞蛋白合成系により適したpIVEX2.3ベクターを使用したコンストラクトを作製し、同様の検討を行なっている。3.serial analysis of gene expression(SAGE)法を用いて3ヶ月齢のBDF1系マウス精巣でのL1配列の発現パターンを調査した。また、老化して精巣での染色体DNAのメチル化などに乱れが生じた場合にともないL1の転写活性が変化する可能性を調査するために、29ヶ月齢のBDF1系マウス、および促進老化のモデルである14ヶ月齢のSAMP1系マウスを用いて、同様に調査を行なった。その結果、いずれの系統、月齢においてもL1配列の発現は極めて低いことが明らかとなった。L1bのマウス精巣における高発現を誘起するために、精巣特異的プロモーターであるヒストンH1t遺伝子のプロモーターの下流にL1bを連結した発現コンストラクトを作製中である。

关于大鼠溶酶体运输调节因子 (Lyst) 基因中存在的 L1b 逆转录转座子，获得了以下发现。 1.将L1b克隆到哺乳动物表达载体pCEP4中，转染培养的HeLa细胞，获得大量有转移的G418抗性集落。我们尝试通过3'RACE方法鉴定L1b插入的基因。然而，在所有克隆集落中都发生了使用 L1b 内相同位点的多聚 A 转换，并且无法鉴定该基因。因此，我们创建了一种新的表达构建体，其中在 L1b 和 G418 抗性标记基因之间插入剪接供体，并正在进行类似的研究。 2.我们尝试使用无细胞蛋白质合成系统制备大量的L1b ORF1和ORF2产物。尽管使用pET-21a作为载体，但没有观察到蛋白质合成。因此，我们使用pIVEX2.3载体创建了一个更适合无细胞蛋白质合成系统的构建体，并正在进行类似的研究。 3.我们采用基因表达系列分析（SAGE）方法研究了3月龄BDF1小鼠睾丸中L1序列的表达模式。此外，为了研究L1转录活性因衰老和睾丸中染色体DNA甲基化紊乱而发生变化的可能性，我们使用29个月大的BDF1小鼠和14只加速衰老模型进行了类似的研究。月大的 SAMP1 小鼠。结果表明，L1序列的表达在所有菌株和年龄中都极低。为了诱导 L1b 在小鼠睾丸中高表达，我们正在创建一种表达构建体，其中 L1b 连接在组蛋白 H1t 基因启动子（睾丸特异性启动子）的下游。

项目成果

期刊论文数量（18）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Xing Y, Nakamura A, Korenaga T, Guo Z, Yao J, Fu X, Matsushita T, Kogishi K, Hosokawa M, Kametani F, Mori M, Higuchi K: "Induction of protein conformational change in mouse senile amyloidosis"J. Biol. Chem.. 277. 33164-33169 (2002)

Xing Y，Nakamura A，Korenaga T，Guo Z，Yao J，Fu X，Matsushita T，Kogishi K，Hosokawa M，Kametani F，Mori M，Higuchi K：“小鼠老年淀粉样变性中蛋白质构象变化的诱导”J。

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Guo Z, Mori M, Fu X, Yao J, Xing Y, Korenaga T, Li G, Matsushita T, Hosokawa M, Higuchi K: "Amyloidosis modifier genes in less amyloidogenic A/J mouse strain."Laboratory Investigations. 83(11). 1605-1613 (2003)

Guo Z、Mori M、Fu X、Yao J、Xing Y、Korenaga T、Li G、Matsushita T、Hosokawa M、Higuchi K：“淀粉样变性较少的 A/J 小鼠品系中的淀粉样变修饰基因。”实验室研究。

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Kitagawa K, Wang J, Matsushita T, Kogishi K, Hosokawa M, Fu X, Guo Z, Mori M, Higuchi K: "Polymorphisms of mouse apolipoprotein A-II : seven alleles found among 41 inbred strains of mice."Amyloid. 10(4). 207-214 (2004)

Kitakawa K、Wang J、Matsushita T、Kogishi K、Hosokawa M、Fu X、Guo Z、Mori M、Higuchi K：“小鼠载脂蛋白 A-II 的多态性：在 41 个近交系小鼠中发现的 7 个等位基因。”淀粉样蛋白。

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

樋口京一, 森政之: "分子生物学・免疫学キーワード辞典(第2版)(永田和宏、宮坂昌之、宮坂信之、山本一彦編集)"医学書院(東京). 1036 (2003)

Kyoichi Higuchi、Masayuki Mori：“分子生物学/免疫学关键词词典（第 2 版）（由 Kazuhiro Nagata、Masayuki Miyasaka、Nobuyuki Miyasaka、Kazuhiko Yamamoto 编辑）”Igaku Shoin（东京）1036（东京）。