新たに発見された活性型L1トランスポゾンを利用した突然変異マウス作出と遺伝子同定

利用新发现的激活L1转座子创建突变小鼠并进行基因鉴定

基本信息

批准号：
14013027
负责人：
森政之
金额：
$ 3.26万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14013027/
关键词：
レトロトランスポゾンラット L1 突然変異 Chediak-Higashi Lyst

项目摘要

ラットのlysosomal trafficking regulator (Lyst)遺伝子内に存在するL1b配列に関して以下の知見を得た。1.ACI-beigeラットにおけるChediak-Higashi症候群様の症状の原因が、Lyst遺伝子内に存在する二つのL1間の組み換えに起因することを明らかとした。そのうちの一つであるL1bの全長をクローニングし、塩基配列の決定を行なった結果、2つのオープンリディングフレーム(ORF1とORF2)とその5'上流域にSp1ボックスを含むプロモーター様配列、3'下流域にpoly A配列、またその全長の上下流に短い反復配列が認められ、典型的なL1レトロトランスポゾン構造を有していることが明らかとなった。ORF2にコードされる蛋白質のアミノ酸配列は、これまでに報告されているヒトおよびマウスの活性型L1配列のものと非常に高い相同性を示した。対照的にORF1にコードされる蛋白質のアミノ酸配列にはORF2産物ほどの高い相同性は認められず、種特異性が明らかとなった。同じLys遺伝子内のL1間の組み換えを有するDA-beigeラットのL1bはORF2内に1塩基欠失を有し、レトロトランスポゾン活性を喪失していることが示唆された。2.突然変異誘発に使用することを考えると生殖系列での発現が必要であるが、L1bはラット精巣で発現されていることが確認された。3.L1bを哺乳動物発現ベクターpCEP4中にクローニングし、培養HeLa細胞にトランスフェクトすることによりレトロトランスポゾン活性を証明した。4.L1bの下流に他の遺伝子(A)を連結してHeLa細胞中で強制発現させると、遺伝子(A)のイントロンのスプライシングが抑制されることを見い出した。

关于LYS溶酶体运输调节剂（LYST）中L1B序列获得了以下知识。 1。揭示了Aci-beige大鼠中Chediak-Higashi综合征样症状的原因是由于LYST基因中两个L1之间的重组。由于克隆L1B的总长度，其中一个并确定基本序列，两个开环框（ORF1和ORF2）和5'上盆地，一个包含SP1框的启动子序列，3'观察到了总长度的上部和下侧的下部和低重复阵列中的序列，并发现它具有典型的L1复古转化结构。到目前为止，在ORF2中编码的蛋白质的氨基酸序列具有很高的家乡人类和小鼠的活性L1序列。相反，编码ORF1中编码的蛋白质的氨基酸序列未被认为是ORF2的高同源性，并且揭示了物种特异性。有人提出，在同一LYS基因中L1之间重组的Da-Beige大鼠的L1b在ORF2中有一个基本损失，并且失去了其复古转运孢子活性。 2。考虑到它用于突变诱导，有必要在生殖关联公司中表达它，但已证实L1B在划痕中表达。 3。将L1b克隆到哺乳动物表达载体PCEP4中，并转染至培养基HeLa细胞以证明复古的转座子活性。 4。发现，如果其他基因（a）连接到L1b的下游并被迫在HeLa细胞中被迫，则抑制了基因（a）的刺激性。