新たに発見された活性型L1トランスポゾンを利用した突然変異マウス作出と遺伝子同定

利用新发现的激活L1转座子创建突变小鼠并进行基因鉴定

• 批准号: 15012224
• 负责人: 森 政之
• 金额: $ 2.69万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15012224/
• 关键词: レトロトランスポゾン; ラット; L1; 突然変異; Chediak-Higashi症候群; Lyst

ラットのlysosomal trafficking regulator(Lyst)遺伝子内に存在するL1b配列に関して以下の知見を得た。1.L1bのレトロトランスポゾン特性を検討する目的で、L1bを哺乳動物発現ベクターpCEP4中にクローニングし、培養HeLa細胞にトランスフェクトして、転移の生じたG418耐性コロニーを多数得た。3'RACE法によるL1bの転移挿入したHeLa細胞の染色体部位の遺伝子の同定を試みた。しかしながら、全クローンコロニーにおいてL1b内の特定の部位を使用したpoly A化が生じており、遺伝子の同定には至らなかった。そこで、L1bとG418マーカー遺伝子との間にスプライスドナーを挿入した新たな発現コンストラクトを作製した。2.serial analysis of gene expression(SAGE)法を用いて3ヶ月齢のBDF1系マウス精巣でのL1配列の発現パターンを調査した。また、老化して精巣での染色体DNAのメチル化などに乱れが生じた場合にともないL1の転写活性が変化する可能性を調査するために、29ヶ月齢のBDF1系マウス、および促進老化のモデルである14ヶ月齢のSAMP1系マウスを用いて、同様に調査を行なった。その結果、いずれの系統、月齢においてもL1配列の発現は極めて低いことが明らかとなった。L1をマウス精巣で強制発現させるためには、より強力なプロモーターを用いる必要があることが示唆された。L1bのマウス精巣での高発現を誘起するために、精巣特異的プロモーターであるヒストンH1t遺伝子のプロモーターの下流にL1bを連結した発現コンストラクトを作製した。

关于大鼠溶酶体运输调节剂（LYST）基因中存在的L1B序列获得了以下发现。 1。为了研究L1B的逆转录座子特性，将L1B克隆到哺乳动物表达载体PCEP4中，并转染到培养的HELA细胞中，以获得大量转移的G418抗性菌落。我们试图在3'race方法中鉴定出用L1B转移的HeLa细胞染色体位点的基因。但是，在所有克隆菌落中都发生了使用L1B内特定位点的多聚体化，并且没有实现基因鉴定。因此，创建了一种新的表达构建体，其中插入了L1B和G418标记基因之间的剪接供体。 2。使用基因表达（SAGE）的串行分析，在3个月大的BDF1小鼠睾丸中研究了L1序列的表达模式。此外，为了调查当染色体DNA甲基化发生由于衰老和其他疾病而发生的L1转录活性可能会改变的可能性，使用29个月大的BDF1小鼠和14个月大的SAMP1小鼠（一种加速衰老的模型）进行了相同的研究。结果，揭示了所有菌株和年龄中L1序列的表达极低。有人提出，必须使用更强的启动子在小鼠睾丸中使用L1的强制表达。为了诱导L1b在小鼠睾丸中的高表达，创建了一种表达构建体，其中L1B在睾丸特异性启动子组蛋白H1T基因的启动子的下游链接。

项目成果

Guo, Mori M, Fu X, Yao J, Xing Y, Korenaga T, Li G, Matsushita T, Hosokawa M, Higuchi K: "Amyloidosis modifier genes in less amyloidogenic A/J mouse strain."Laboratory Investigations. 83(11). 1605-1613 (2003)

Guo、Mori M、Fu X、Yao J、Xing Y、Korenaga T、Li G、Matsushita T、Hosokawa M、Higuchi K：“淀粉样变性较少的 A/J 小鼠品系中的淀粉样变修饰基因。”实验室研究。

Kitagawa K, Wang J, Matsushita T, Kogishi K, Hosokawa M, Fu X, Guo Z, Mori M, Higuchi K: "Polymorphisms of mouse apolipoprotein A-II : seven alleles found among 41 inbred strains of mice."Amyloid. 10(4). 207-214 (2004)

Kitakawa K、Wang J、Matsushita T、Kogishi K、Hosokawa M、Fu X、Guo Z、Mori M、Higuchi K：“小鼠载脂蛋白 A-II 的多态性：在 41 个近交系小鼠中发现的 7 个等位基因。”淀粉样蛋白。

Guo Z, Higuchi K, Mori M: "Spontaneous hypomorphic mutations in antioxidant enzymes of mice."Free Radical Biology and Medicine. 35(12). 1645-1652 (2003)

郭Z，樋口K，森M：“小鼠抗氧化酶的自发亚形突变。”自由基生物学和医学。

Yao J, Chiba T, Sakai J, Hirose K, Yamamoto M, Hada A, Kuramoto K, Higuchi K, Mori M: "Mouse testis transcriptome revealed using serial analysis of gene expression."Mammalian Genome. 印刷中. (2004)

Yao J、Chiba T、Sakai J、Hirose K、Yamamoto M、Hada A、Kuramoto K、Higuchi K、Mori M：“使用基因表达的系列分析揭示小鼠睾丸转录组。”哺乳动物基因组。

Masui N, Mori M, Nishikawa T, Takagi Y, Asai H, Yanabe M, Yamasaki K, Serikawa T, Sato K: "An allele-specific genotyping method for rat Lyst (lysosomal trafficking regulator) gene."Experimental Animals. 53(1). 77-80 (2004)

Masui N、Mori M、Nishikawa T、Takagi Y、Asai H、Yanabe M、Yamasaki K、Serikawa T、Sato K：“大鼠 Lyst（溶酶体运输调节因子）基因的等位基因特异性基因分型方法。”实验动物。