新たに発見された活性型L1トランスポゾンを利用した突然変異マウス作出と遺伝子同定

利用新发现的激活L1转座子创建突变小鼠并进行基因鉴定

• 批准号: 15012224
• 负责人: 森 政之
• 金额: $ 2.69万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15012224/
• 关键词: レトロトランスポゾン; ラット; L1; 突然変異; Chediak-Higashi症候群; Lyst

ラットのlysosomal trafficking regulator(Lyst)遺伝子内に存在するL1b配列に関して以下の知見を得た。1.L1bのレトロトランスポゾン特性を検討する目的で、L1bを哺乳動物発現ベクターpCEP4中にクローニングし、培養HeLa細胞にトランスフェクトして、転移の生じたG418耐性コロニーを多数得た。3'RACE法によるL1bの転移挿入したHeLa細胞の染色体部位の遺伝子の同定を試みた。しかしながら、全クローンコロニーにおいてL1b内の特定の部位を使用したpoly A化が生じており、遺伝子の同定には至らなかった。そこで、L1bとG418マーカー遺伝子との間にスプライスドナーを挿入した新たな発現コンストラクトを作製した。2.serial analysis of gene expression(SAGE)法を用いて3ヶ月齢のBDF1系マウス精巣でのL1配列の発現パターンを調査した。また、老化して精巣での染色体DNAのメチル化などに乱れが生じた場合にともないL1の転写活性が変化する可能性を調査するために、29ヶ月齢のBDF1系マウス、および促進老化のモデルである14ヶ月齢のSAMP1系マウスを用いて、同様に調査を行なった。その結果、いずれの系統、月齢においてもL1配列の発現は極めて低いことが明らかとなった。L1をマウス精巣で強制発現させるためには、より強力なプロモーターを用いる必要があることが示唆された。L1bのマウス精巣での高発現を誘起するために、精巣特異的プロモーターであるヒストンH1t遺伝子のプロモーターの下流にL1bを連結した発現コンストラクトを作製した。

我们获得了关于大鼠溶酶体运输调节因子 (Lyst) 基因中 L1b 序列的以下发现。 1.为了考察L1b的逆转录转座子特性，将L1b克隆到哺乳动物表达载体pCEP4中并转染到培养的HeLa细胞中，获得大量具有转移的G418抗性集落。我们尝试使用 3'RACE 方法鉴定 HeLa 细胞染色体位点上 L1b 转座的基因。然而，在所有克隆集落中都发生了使用 L1b 内特定位点的多聚 A 转化，并且无法鉴定该基因。因此，创建了一个新的表达构建体，其中在 L1b 和 G418 标记基因之间插入剪接供体。 2.我们采用基因表达系列分析（SAGE）方法研究了3月龄BDF1小鼠睾丸中L1序列的表达模式。此外，为了研究L1转录活性因衰老和睾丸中染色体DNA甲基化紊乱而发生变化的可能性，我们使用29个月大的BDF1小鼠和14只加速衰老模型进行了类似的研究。月大的 SAMP1 小鼠。结果表明，L1序列的表达在所有菌株和年龄中都极低。这些结果表明需要使用更强的启动子来强制L1在小鼠睾丸中表达。为了诱导 L1b 在小鼠睾丸中高表达，我们创建了一个表达构建体，其中 L1b 连接在组蛋白 H1t 基因启动子（睾丸特异性启动子）的下游。

项目成果

Guo, Mori M, Fu X, Yao J, Xing Y, Korenaga T, Li G, Matsushita T, Hosokawa M, Higuchi K: "Amyloidosis modifier genes in less amyloidogenic A/J mouse strain."Laboratory Investigations. 83(11). 1605-1613 (2003)

Guo、Mori M、Fu X、Yao J、Xing Y、Korenaga T、Li G、Matsushita T、Hosokawa M、Higuchi K：“淀粉样变性较少的 A/J 小鼠品系中的淀粉样变修饰基因。”实验室研究。

Kitagawa K, Wang J, Matsushita T, Kogishi K, Hosokawa M, Fu X, Guo Z, Mori M, Higuchi K: "Polymorphisms of mouse apolipoprotein A-II : seven alleles found among 41 inbred strains of mice."Amyloid. 10(4). 207-214 (2004)

Kitakawa K、Wang J、Matsushita T、Kogishi K、Hosokawa M、Fu X、Guo Z、Mori M、Higuchi K：“小鼠载脂蛋白 A-II 的多态性：在 41 个近交系小鼠中发现的 7 个等位基因。”淀粉样蛋白。

Guo Z, Higuchi K, Mori M: "Spontaneous hypomorphic mutations in antioxidant enzymes of mice."Free Radical Biology and Medicine. 35(12). 1645-1652 (2003)

郭Z，樋口K，森M：“小鼠抗氧化酶的自发亚形突变。”自由基生物学和医学。

Yao J, Chiba T, Sakai J, Hirose K, Yamamoto M, Hada A, Kuramoto K, Higuchi K, Mori M: "Mouse testis transcriptome revealed using serial analysis of gene expression."Mammalian Genome. 印刷中. (2004)

Yao J、Chiba T、Sakai J、Hirose K、Yamamoto M、Hada A、Kuramoto K、Higuchi K、Mori M：“使用基因表达的系列分析揭示小鼠睾丸转录组。”哺乳动物基因组。

Masui N, Mori M, Nishikawa T, Takagi Y, Asai H, Yanabe M, Yamasaki K, Serikawa T, Sato K: "An allele-specific genotyping method for rat Lyst (lysosomal trafficking regulator) gene."Experimental Animals. 53(1). 77-80 (2004)

Masui N、Mori M、Nishikawa T、Takagi Y、Asai H、Yanabe M、Yamasaki K、Serikawa T、Sato K：“大鼠 Lyst（溶酶体运输调节因子）基因的等位基因特异性基因分型方法。”实验动物。