マウス個体老化の分子的把握:老化臓器の遺伝子発現レパートリィの作成

对小鼠衰老的分子理解：创建衰老器官的基因表达库

基本信息

批准号：
11877021
负责人：
樋口京一
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

高齢マウスとしては最も広く研究に用いられている系統の一つであるBDF1マウスの雄3ヶ月齢および31ヶ月齢と促進老化のモデルマウスであるSAMP1の雄14ヶ月齢マウスを屠殺し精巣のRNAを分離した。老化の分子的把握を目指すため、精巣での遺伝子発現の差異の網羅的比較をSerial Analysis of Gene Expression (SAGE)法とSuppression Subtractive Hybridization (SSH)法で試みた。より効率良い解析を目指して14塩基のsingle tagを利用する改変SAGEライブラリーを3種の精巣mRNAから作製した。無作為的に数十クローンのプラスミドの塩基配列を読み、ほぼ予測通りのTagの挿入を確認した。今後、各ライブラリーについて約1000クローン(=25,000 Tags)の塩基配列を読み、3つのライブラリーのデータを比較して老化に伴う精巣での遺伝子発現レパートリーの変化の分子的把握を目指す。またSAMP1およびSAMR1マウスの精巣mRNAより二本鎖cDNAを合成した後、PCR-Select^<TM>cDNA Subtraction Kit (CLONTECH)をもちいてSAMP1-SAMR1およびSAMR1-SAMP1の二種類のサブトラクションライブラリーを作製した。ディファレンシャルスクリーニングによりボジティブクローンを選択し、さらにノザンブロットにより発現の差異を調べた。既知遺伝子3種類と未知遺伝子2種類に発現の違いが見られた。SAMR1において発現が高かったGsg1およびACTは成熟精子細胞において発現していると報告されている遺伝子であり、未知遺伝子の一つ(Tall)も3週齢以降に発現して来る。これら3つの遺伝子の発現は11ヶ月齢のSAMP1でさらに減少しており精巣の加齢との関連が示された。

作为用于研究最广泛使用的系统之一，BDF1小鼠雄性3个月大，31个月 - 染色和促进衰老模型小鼠，SAMP1雄性14个月大的小鼠和睾丸的RNA分离。为了使分子理解衰老，通过基因express（SAGE）的序列分析（SSH）的序列分析来尝试睾丸中基因表达的比较。使用三个睾丸mRNA创建了使用14个基本单个标签的修改的鼠尾草库，旨在进行更有效的分析。我随机读取几个克隆质粒的基本序列，并几乎如预期的那样确认了标签的插入。将来，我们将读取每个库的大约1000个克隆（= 25,000个标签）的基本序列，比较三个库的数据，并旨在掌握与衰老相关的睾丸中基因表达曲目的变化。从SAMP1和SAMR1小鼠mRNA合成双链cDNA后，用PCR-SELECT^<tm>创建库的两种类型的SAMP1-SAMR1和SAMR1-SAMP1确实做到了。通过差分筛选选择了Bogiite克隆，并通过Nozan Brot检查表达差异。三种类型的基因和两个未知基因之间有三种类型的表达式。 GSG1和ACT在SAMR1中高度表达，是成熟精子细胞中报道的基因，三周后也出现了未知基因（高）。这三个基因的表达已进一步降低了11个月大的SAMP1，表明与睾丸衰老的关系。