ファージディスプレイライブラリーを用いた感染防御と免疫制御法の開発

利用噬菌体展示库开发感染预防和免疫控制方法

基本信息

批准号：
13226105
负责人：
杉村和久
金额：
--
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13226105/
关键词：
IL-6 MCP-1 ペプチドミミックヒト抗体ファージライブラリー scFv 感染防御免疫制御

项目摘要

私どもが考案した手法(Nature biotech. 16:267-270,1998)により、Monocyte chemoattractant protein-1(MCP-1)に特異的かつ阻害活性を示すモノクロナル抗体を用い、peptide-display fd phage libraryを探査し、G25とC27と名付けたMCP-1 peptide mimic motifを明らかにした。これらのモチーフのMCP-1に対する阻害活性は合成ペプチドにより確認された。これらのモチーフには2つのシステインが含まれているが、これをセリンに置換するとその阻害活性が消失することより、ジスルフィド結合の形成が阻害活性には重要であることが明かとなった。また本年度は、IL-6シグナルの阻害活性を有する分子の設計を試みた。Peptide libraryから#37と名付けたIL-6活性を阻害するpeptide motifが見い出した。#37はヒトのIL-6レセプターを有するKT-3細胞株のIL-6依存性に増殖を阻害するが、マウスのIL-6レセプターを有するMH60細胞株の増殖は阻害しないという興味深い活性を示すことを明らかにした。更に、ヒト抗体(scFv)を提示するファージライブラリーを用いる研究手法によるインヒビターを開発を開始した。この目的のために私どもは20名のヒト健常人の末梢血リンパ球を用いて、大規模な抗体ライブラリーを4種類(VとV、VとV、VとV、VとV作製した。このライブラリーは国際的にも優れて大規模なヒト抗体ライブラリーである。これを用いて、肥満細胞からのヒスタミンの放出を阻害するFc RI特異的scFvの単離、およびIL-6に依存して増殖するヒトKT-3細胞の増殖を阻害するIL-6特異的scFvの単離に成功した。

使用我们设计的方法（NatureBiotech。16：267-270，1998），我们使用了单克隆抗体，这些抗体表现出对单核细胞化学吸引蛋白1（MCP-1）的特定和抑制活性，探索肽 - display phage图书馆，揭示了MCP-1肽MIMIMIMICICIFIFS，名为G25和C27。这些基序对MCP-1的抑制活性通过合成肽证实。这些基序包含两个半胱氨酸，当它们被丝氨酸取代时，其抑制活性消失了，这清楚地表明，二硫键的形成对于抑制活性很重要。此外，今年我们试图设计具有IL-6信号抑制活性的分子。从肽文库中发现了一个抑制IL-6活性的肽基序，称为＃37。＃37证明IL-6依赖性地抑制了使用人IL-6受体的KT-3细胞系的生长，但没有使用小鼠IL-6受体的MH60细胞系生长。此外，我们已经使用噬菌体文库（SCFV）开始使用研究方法来开发抑制剂。 To this end, we have created four large-scale antibody libraries (V and V, V and V, V, V, V and V, V and V, V and V, V and V, for this library is an internationally superior and large-scale human antibody library. Using this, we have successfully isolated Fc RI-specific scFv, which inhibits the release of histamine from mast cells, and IL-6-specific scFv, which inhibits以IL-6依赖性方式生长的人类KT-3细胞的增殖。