塩基性ヘリックスループヘリックス転写機構制御と細胞治療を融合する神経再生治療開発

开发结合基本螺旋-环-螺旋转录机制控制和细胞治疗的神经再生疗法

• 批准号: 22K09280
• 负责人: 西村 由介
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09280/
• 关键词: ヒト由来歯髄幹細胞; Neurod4; MCP-1; TGF-β; 下肢運動機能; マクロファージ; 脊髄損傷; 神経再生; 歯髄幹細胞; バイオイメージング

①　bHLH神経転写因子の遺伝子導入、 in vitroでの神経栄養因子の測定：アフリカツメガエル幼生期に高発現している脊髄再生に関わるNeurod4（bHLH神経転写因子）をシュードウイルスベクターでSHED（ヒト由来歯髄幹細胞）に良好に遺伝子導入し(Neurod4-SHED)、ウエスタンブロットでNeurod4が発現されていることが確認できた。その後、in vitroで培養し、神経栄養因子の分泌（培養上清での測定）を測定し、Neurod4-SHEDをnaiveのSHEDと比較した結果、MCP-1、TGF-βが有意に上昇していることがつきとめられた。これらが炎症惹起するM1マクロファージより炎症抑制するM2マクロファージを活性化する機能を有するため、マクロファージの動態を解析することを現在行っている。②　ラットへのSHED投与、機能評価、組織学的解析：胸髄損傷ラットモデルを用い、SHEDを胸髄内に投与した。下肢運動機能スコア（BBBスコア）で良好な下肢の運動機能回復がnaiveのSHEDとの比較で有意差をもって確認された。③　Neurod4-SHEDの造腫瘍性試験：Neurod4-SHEDを移植して8週間の時点では、ラットの健康状態には問題がなく、造腫瘍性も否定されている。

①bHLH神经转录因子基因导入，体外神经营养因子测定：用SHED（人源牙利用假病毒载体将基因成功导入干细胞（Neurod4-SHED）中，并通过Western blotting证实Neurod4得到表达。之后，我们对其进行体外培养，测量神经营养因子的分泌（在培养上清液中测量），并将Neurod4-SHED与naive SHED进行比较，结果发现MCP-1和TGF-β显着增加。确实有。我们目前正在分析这些巨噬细胞的动态，因为它们能够激活抑制炎症的 M2 巨噬细胞，而不是诱导炎症的 M1 巨噬细胞。 ②大鼠SHED给药、功能评价及组织学分析：采用胸脊髓损伤大鼠模型，胸腔内给药SHED。下肢运动功能评分（BBB评分）证实下肢运动功能恢复良好，与初次SHED相比有显着差异。 ③Neurod4-SHED致瘤性测试：Neurod4-SHED植入8周后，大鼠健康状况未出现问题，排除致瘤性。

项目成果

遺伝子導入歯髄幹細胞による新たな脊髄再生治療

使用基因转移牙髓干细胞的新型脊髓再生治疗

• 发表时间: 2022
• 作者: 加藤寛之;西村由介
• 通讯作者: 西村由介