In vivoでがん転移を促進するマイコプラズマ分子の構造と機能

体内促进癌症转移的支原体分子的结构和功能

基本信息

批准号：
06670237
负责人：
杉村和久
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670237/
关键词：
癌転移マイコプラズマサイトカイン遺伝子発現

项目摘要

マウスを用いたヒト大腸癌RPMI4788細胞の肺転移の実験系に関するこれまでの研究により、In vivoでマイコプラズマ由来のAg243-5分子が肺への癌転移促進作用を示すことが明らかにされた。本研究ではこの分子機構を明らかにするため、In vitroの実験系においてAg243-5が細胞にいかなる影響を及ぼすのかについて検討を進めた。サイトカインの産生に及ぼす影響を検討するために、Ag243-5投与後のマウスの脾臓および肺について,IFN-α,IFN-β,IFN-γ,TNF-α,TNF-β,IL-1α,IL-1β,IL-2,IL-3,IL-4,IL-5,IL-6,IL-7,IL-9,IL-10,G-CSF,M-CFS,GM-CSF,LIF,TGF-βの遺伝子発現に及ぼす影響をRT-PCR法で検討した。その結果、いずれの遺伝子発現においてもヒト大腸癌RPMI4788細胞の肺転移との関連性は認められなかった。このため、当初予定していたAg243-5遺伝子のトリプトファンをコードするTGA(通常はストップコドンとして読まれる)をTGGに改変し、E.ColiでAg243-5遺伝子を発現させ、リコンビナントAg243-5を調整する計画は延期された。接着分子の発現に対する影響を検討する必要があると考えられる。ヒト末梢血リンパ球のcDNAについて、Ag243-5のホモログの有無を調べるため、Ag243-5遺伝子断片を作成し,Southern blot解析、およびAg243-5遺伝子の合成プライマーを用いたRT-PCRを行ったが、ヒトでのホモログは見いだされなかった。既知のタンパク分子データーバンクを用いたアミノ酸配列のホモロジー検索からも、何らかの機能を推測させるモチーフは得られていない。今後、本研究を推進するためには、Ag243-5の生理活性を追跡しうるIn vitroの実験システムの確立が必須であると考えられる。

先前对使用小鼠的人类结肠癌RPMI4788细胞的肺转移实验系统的研究表明，支原体衍生的AG243-5分子对体内对肺的癌症转移具有主动作用。在这项研究中，为了阐明这种分子机制，我们研究了AG243-5对体外实验系统中细胞的影响。 To investigate the effects on cytokine production, we investigated the effects of IFN-α, IFN-β, IFN-γ, TNF-α, TNF-β, IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, G-CSF, M-CFS, GM-CSF, LIF, and TGF-β on AG243-5给药后，小鼠脾脏和肺中的基因表达。结果，在任何一个基因表达中都没有发现与人类结肠癌RPMI4788细胞的肺转移相关。因此，将最初计划的TGA编码AG243-5基因中的色氨酸（通常为终止密码子）被修改为TGG，表达大肠杆菌中的AG243-5基因，并将重组AG243-5调整。人们认为有必要研究对粘附分子表达的影响。为了检查在人外周血血液淋巴细胞cDNA中是否存在AG243-5同源物，创建了AG243-5基因片段，进行了Southern印迹分析，并使用AG243-5基因的合成引物进行了RT-PCR，但是在humans中没有AG243-5基因。使用已知蛋白质分子数据库对氨基酸序列进行同源性搜索不提供推断任何功能的基序。为了将来促进这项研究，认为建立一个可以跟踪AG243-5生理活性的体外实验系统至关重要。