ストレス蛋白・癌抗原融合蛋白分子による抗腫瘍効果

应激蛋白/癌抗原融合蛋白分子的抗肿瘤作用

• 批准号: 11140257
• 负责人: 鵜殿 平一郎
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11140257/
• 关键词: Hsc70; 癌抗原ペプチド; CTL; ワクチン

マウスのhsc70遺伝子を鋳型として3'側のプライマーに癌抗原ペプチドpRL1a(RL♂1)、TRP2(B16)、又はマラリアCS抗原、OVA抗原(E.G7)、HY抗原をコードするmini-geneをそれぞれ入れ、PCR法で遺伝子増幅する。これを発現ベクターに組み込み大腸菌にて大量に発現された。それぞれの蛋白分子1mgで隔週2回免疫し、脾臓細胞を取り出し同ペプチドでin vitro刺激を行いELISPOT法とクロム51遊離試験で効果を比較した。いずれの抗原ペプチドでも特異的な細胞傷害性T細胞(CTL)の誘導が可能であることが判明した。即ち、抗原ペプチドの種類に制限はないと考えられた。さらにRL♂1、B16、E.G7を皮内に注射しvivoで腫瘍増殖の抑制効果を判定する試みを現在も続けているが、完全抑制とまではいかないようである。しかし、マラリア抗原MSP-1のほぼ全長とhscp70の融合分子はスポロゾイト攻撃感染を肝臓期に完全に抑制するという実験結果も我々は得ており、このことから単一のCTLエピトープだけではなくヘルパーエピトープも含めた複数のエピトープがより強力なワクチン効果を発揮する上で重要であると推察された。通常、リコンビナントhsc70分子にはほとんどATPase活性が認められないのが現実であるが、我々の特種なrefolding操作によりnative分子と同様のATPase活性を持ったhsc70蛋白分子の精製を可能にした。このATPase活性の強さとCTL感作の強さに相互関係があることがわかった。また、hsc70のN末側アミノ酸280番から300番目の間にCTL感作に大きく影響を及ぼす領域があることが変異hsc70分子を用いた実験で明らかになった。

使用小鼠的HSC70基因作为小鼠，3'侧的底漆是癌症抗原肽PRL1A（RL♂1），TRP2（B16）或疟疾CS抗原，OVA抗原（例如7）和Mini - 编码抗原的基因。这是在大肠杆菌中大量的表达载体中内置的。每个蛋白质分子每周两次免疫，每周两次，并去除脾细胞，并将效果与ELISPOT方法和51铬免费测试进行了比较。发现两种抗原肽都可以指导特定的细胞损伤T细胞（CTL）。也就是说，认为抗原肽的类型没有限制。此外，RL♂1，B16和E.G7正在注射皮肤，体内一直试图确定肿瘤增殖的作用，但似乎并未完全抑制。但是，我们获得了实验结果，即疟疾抗原MSP-1和HSCP70融合分子在肝周期完全抑制了Spollozoite攻击感染，这不仅是单个CTL表位，而且还假定助理表位。包括，对于证明更强大的疫苗作用很重要。通常，现实是，ATPase活性很少在重构HSC 70分子中被识别，但是我们的特殊重折叠操作使纯化具有与天然分子相同的ATPase活性的HSC70蛋白成为可能。事实证明，这种ATPase活性的强度和CTL感觉的强度在强度之间。此外，使用突变体HSC 70分子的实验表明，有一个区域极大地影响了N端N端侧N-端n端的N端氨基酸280和300之间的CTL感觉。

项目成果

Fujiwara,K.,Udono,H.et al.: "Electrophoretic and serologic characterization of 56 kDa antigen(M56)with autologus serum derived from a chondrosarcoma patient:a shared antigen of immunoresponses in cancer and autoimmune diseases."Electrophoresis. 20. 3335-3

Fujiwara,K.,Udono,H.等人：“使用来自软骨肉瘤患者的自体血清对 56 kDa 抗原 (M56) 进行电泳和血清学表征：癌症和自身免疫性疾病中免疫反应的共享抗原。”电泳。