シヤペロンによる再構築されたプロテアソームの構造機能解析

伴侣重组蛋白酶体的结构和功能分析

基本信息

批准号：
17659143
负责人：
鵜殿平一郎
金额：
$ 2.11万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

分子シャペロンhsp90αを用いて、任意の細胞抽出液より26Sプロテアソームをin vitro構築することが可能である事を明らかにし、その構造及び機能の解析を行った。その結果以下の事が明らかになった。1、ヒスチジンタグ-hsp90αをATP存在下の細胞抽出液に加えイミダゾールで回収する事により、26Sプロテアソーム及びハイブリッドプロテアソームが得られた。これらのプロテアソームは特異的基質であるsuc-LLVY-amcを加水分解した。またこの分子複合体は、hsp90の特異的阻害剤であるゲルダナマイシン処理により構造が破壊された。即ち、これらのプロテアソームの構築とその維持にhsp90αが重要な役割を果たしていることが推察された。2、ヒスチジンタグ-hsp90αをATP非存在下の細胞抽出液に加える事により、hsp90α-20Sプロテアソームを構築する事ができた。このプロテアソーム複合体は、特異的基質であるsuc-LLVY-amcに対する加水分解活性を示さないが、MHCクラスIペプチドをフランキングを含む合成ペプチドから切り出す事ができた。また、この分子複合体の中には、hsc70,hsp40,p23,CHIPなどのシャペロン或はコシャペロン分子が会合していた。この分子複合体をさらにATP処理するとhsp40,p23,CHIPは遊離し最後にhsp90α/hsc70/20Sのみからなる複合体が得られた。hsp90α/hsc70/20Sは同様に合成ペプチドを切断する事ができた。一方、シャペロンの会合しない20Sのみの構造ではMHCクラスIペプチドを切り出す事は出来なかった。この結果は新規のプロテアソームの存在を示唆するが、生理学的にそのような構造のプロテアソームが細胞内に存在するか否かについてはさらなる検討が必要と考えられた。

使用分子CheperonHSP90α，可以发现可以在体外构建26S蛋白质体而不是任何细胞提取物，并分析其结构和功能。结果，揭示了以下内容。 1。通过将组氨酸TAG-HSP90α收集到ATP的存在下并用咪唑收集的细胞提取物，获得了26S Protea的一些和杂化提案。这些蛋白酶水解的Suplvy-AMC，一种特定的底物。 Geldanamycin处理破坏了该分子复合材料的结构，Geldanamycin处理是HSP90的特定抑制剂。换句话说，假定HSP90α在这些蛋白质体的构建和维持中起着重要作用。 2。通过在ATP不存在的细胞提取物中添加组氨酸TAG-HSP90α，HSP90α-20S Protea可以构建一些。该蛋白酶复合物不会显示出针对特定底物的Suc-llvy-AMC的水解活性，但可以从含有Franking的合成肽中切出MHC类蛋白肽。在该分子复合材料中，符合HSC70，HSP40，P23，芯片等分子分子。当进一步处理该分子复合材料时，HSP40，P23和CHIP被释放，最后仅获得由HSP90α/HSC70/20S组成的复合物。 HSP90α/HSC70/20s也可以减少合成肽。另一方面，只有20 s结构不符合伴侣，MHC类的里旋无法切除。这表明存在一种新的蛋白质组，但是有必要考虑这种结构性原生物是否存在于细胞中。

项目成果

期刊论文数量（6）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Heat Shock Proteinをアジュバントに用いたワクチンの有用性

使用热休克蛋白作为佐剂的疫苗的效用

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Surgery Frontier 13(3)
影响因子：
0
作者：
Kazuki Taniguchi;Shinichiro Sasahara et al.;Iuchi Y;Arawaka S;Kobayashi H;Nara H;Udono H et al.;山野武寿他;水上修作他
通讯作者：
水上修作他

Antigen presentation to Lymphocytes

抗原呈递给淋巴细胞

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
Encyclopedia of Life Sciences (In press)
影响因子：
0
作者：
Kazuki Taniguchi;Shinichiro Sasahara et al.;Iuchi Y;Arawaka S;Kobayashi H;Nara H;Udono H et al.
通讯作者：
Udono H et al.

プロテアソームの再構成方法

如何重建蛋白酶体

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

IFN_γによるMHCクラスI発現機構の調節

IFN_γ对MHC I类表达机制的调控

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Ann.Rev.免疫2007
影响因子：
0
作者：
Kazuki Taniguchi;Shinichiro Sasahara et al.;Iuchi Y;Arawaka S;Kobayashi H;Nara H;Udono H et al.;山野武寿他
通讯作者：
山野武寿他

フロテアソーム調節薬およびその用途

Floteasome 调节剂及其用途

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

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鵜殿平一郎

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鵜殿平一郎

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上原健敬　榮川伸吾　國定勇希　渡邉元嗣　友信奈保子　吉田晶　藤原智洋　国定俊之　鵜殿平一郎　尾崎敏文