シヤペロンによる再構築されたプロテアソームの構造機能解析

伴侣重组蛋白酶体的结构和功能分析

基本信息

批准号：
17659143
负责人：
鵜殿平一郎
金额：
$ 2.11万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

分子シャペロンhsp90αを用いて、任意の細胞抽出液より26Sプロテアソームをin vitro構築することが可能である事を明らかにし、その構造及び機能の解析を行った。その結果以下の事が明らかになった。1、ヒスチジンタグ-hsp90αをATP存在下の細胞抽出液に加えイミダゾールで回収する事により、26Sプロテアソーム及びハイブリッドプロテアソームが得られた。これらのプロテアソームは特異的基質であるsuc-LLVY-amcを加水分解した。またこの分子複合体は、hsp90の特異的阻害剤であるゲルダナマイシン処理により構造が破壊された。即ち、これらのプロテアソームの構築とその維持にhsp90αが重要な役割を果たしていることが推察された。2、ヒスチジンタグ-hsp90αをATP非存在下の細胞抽出液に加える事により、hsp90α-20Sプロテアソームを構築する事ができた。このプロテアソーム複合体は、特異的基質であるsuc-LLVY-amcに対する加水分解活性を示さないが、MHCクラスIペプチドをフランキングを含む合成ペプチドから切り出す事ができた。また、この分子複合体の中には、hsc70,hsp40,p23,CHIPなどのシャペロン或はコシャペロン分子が会合していた。この分子複合体をさらにATP処理するとhsp40,p23,CHIPは遊離し最後にhsp90α/hsc70/20Sのみからなる複合体が得られた。hsp90α/hsc70/20Sは同様に合成ペプチドを切断する事ができた。一方、シャペロンの会合しない20Sのみの構造ではMHCクラスIペプチドを切り出す事は出来なかった。この結果は新規のプロテアソームの存在を示唆するが、生理学的にそのような構造のプロテアソームが細胞内に存在するか否かについてはさらなる検討が必要と考えられた。

使用分子伴侣HSP90α，可以发现可以在任何细胞提取物中构造26S蛋白酶体，并分析其结构和功能。结果揭示了以下内容：1。在ATP存在下将组氨酸TAG-HSP90α添加到细胞提取物中，并用咪唑恢复，从而导致26S蛋白酶体和杂化蛋白酶体。这些蛋白酶体水解了特定的底物，Sup-llvy-AMC。该分子复合物的结构也被Geldanamycin（一种特异性HSP90的特异性抑制剂）的处理破坏了。也就是说，据估计，HSP90α在这些蛋白酶体的构建和维持中起重要作用。 2。通过在没有ATP的情况下将组氨酸TAG-HSP90α添加到细胞提取物中，构建了HSP90α-20S蛋白酶体。这种蛋白酶体复合物对特定底物（Suc-lly-AMC）没有水解活性，但能够从含有侧翼的合成肽中对MHC I类肽进行切除。此外，伴侣或伴侣分子（例如HSC70，HSP40，P23和CHIP）相互关联。该分子复合物的进一步ATP处理释放了HSP40，P23和芯片，最后是仅由HSP90α/HSC70/20s组成的复合物。 HSP90α/HSC70/20s能够以相同的方式切割合成肽。另一方面，MHC I类肽不能仅使用20s的结构切除，而该结构与伴侣不相关。尽管该结果表明存在一种新型蛋白酶体，但人们认为需要进一步研究细胞内生理结构化的蛋白酶体。

项目成果

期刊论文数量（6）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Heat Shock Proteinをアジュバントに用いたワクチンの有用性

使用热休克蛋白作为佐剂的疫苗的效用

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Surgery Frontier 13(3)
影响因子：
0
作者：
Kazuki Taniguchi;Shinichiro Sasahara et al.;Iuchi Y;Arawaka S;Kobayashi H;Nara H;Udono H et al.;山野武寿他;水上修作他
通讯作者：
水上修作他

Antigen presentation to Lymphocytes

抗原呈递给淋巴细胞

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
Encyclopedia of Life Sciences (In press)
影响因子：
0
作者：
Kazuki Taniguchi;Shinichiro Sasahara et al.;Iuchi Y;Arawaka S;Kobayashi H;Nara H;Udono H et al.
通讯作者：
Udono H et al.

プロテアソームの再構成方法

如何重建蛋白酶体

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

IFN_γによるMHCクラスI発現機構の調節

IFN_γ对MHC I类表达机制的调控

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Ann.Rev.免疫2007
影响因子：
0
作者：
Kazuki Taniguchi;Shinichiro Sasahara et al.;Iuchi Y;Arawaka S;Kobayashi H;Nara H;Udono H et al.;山野武寿他
通讯作者：
山野武寿他

フロテアソーム調節薬およびその用途

Floteasome 调节剂及其用途

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

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鵜殿平一郎其他文献

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鵜殿平一郎

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上原健敬　榮川伸吾　國定勇希　渡邉元嗣　友信奈保子　吉田晶　藤原智洋　国定俊之　鵜殿平一郎　尾崎敏文