ストレス蛋白の分子生物学的特性に基づく癌免疫治療研究

基于应激蛋白分子生物学特性的癌症免疫治疗研究

• 批准号: 13218102
• 负责人: 鵜殿 平一郎
• 金额: $ 3.33万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13218102/
• 关键词: 癌抗原ペプチド; CTL; hac70; ワクチン; ヘルパーペプチド

リコンビナントhsc70-癌抗原ペプチド融合分子により活性の高いCTLを誘導できることを我々は明らかにした。一方CTL認識ペプチドをIFAと混合して免疫する際に同じMHCハプロタイプ(クラスII)拘束性のヘルパーペプチドと同時投与してやるとCTLの感作が強く行われる。そこで、hsc70分子のN末にモデル抗原OVA(ovalubumin)のI-A^b拘束性ペプチドOVA_<265-280>を融合し、同時にC末にCTLエピトープOVA_<257-264>を融合させたリコンビナント分子を作製した。この分子でマウスを免疫し脾臓細胞をin vitroで6日間ペプチド刺激し、得られたエフェクター細胞(CD8^+T細胞)の細胞傷害活性とELISPOTアッセイ法によるIFNγ産生細胞数を解析した。その結果細胞傷害活性はCTLエピトープ単独融合分子とヘルパー及びCTLエピトープ両方融合分子では差が認められなかった。しかし、IFNγ産生細胞数はヘルパーエピトープ付加により、2〜4倍に増加した。即ち、ヘルパーエピトープはhsc70に融合した場合、CD8^+T細胞の感作活性を増強させることが判明した。OVA_<265-280>の代わりにI-A^d拘束性のPlasmosium yoelii circumsporozoite蛋白由来のヘルパーエピトープを融合させた場合にはOVA_<257-264>に対する反応性の亢進は認められないことよりMHC拘束性が確認された。さらにOVA_<265-280>とマウスメラノーマ抗原TRP2_<180-188>の両方をhsc70に融合し、同様に解析した結果、TRP2_<180-188>に対してIFNγ産生細胞数はTRP2_<180-188>単独融合分子の場合よりもやはり2〜4倍増加していた。即ち、ヘテロのヘルパーエピトープであってもMHC拘束性が一致していれば感作されるCD8^+T細胞数が増加することが判明した。

我们已经表明，重组HSC70-癌症抗原肽融合分子可以诱导高度活性的CTL。另一方面，当将CTL识别肽与IFA混合并免疫时，当与相同的MHC单倍型（II类）限制的辅助辅助肽共同管理时，CTL敏化会强烈地进行。因此，制备了重组分子，其中模型抗原OVA（卵卢比素）的I-A^B限制的肽OVA_ <265-280>与HSC70分子的N末端融合在一起，同时又融合了CTL Epope Ova_ <257-264> - n-Tenter fentiin。用该分子对小鼠进行免疫，并在体外刺激脾细胞6天，以分析获得的效应细胞的细胞毒性活性（CD8^+T细胞）和ELISPOT分析产生的IFNγ产生细胞的数量。结果，单独的CTL表位融合分子与辅助和CTL表位的融合分子之间没有观察到细胞毒性活性的差异。但是，通过添加辅助表位，产生IFNγ的细胞数量增加了2-4倍。也就是说，发现与HSC70融合时，辅助表位会增强CD8^+T细胞的敏化活性。当融合源自I-A^d限制的质子菌圆圈蛋白的辅助表位，而不是OVA_ <265-280>融合时，没有观察到对OVA__ <257-264>的反应性增加，从而确认了MHC限制。此外，OVA_ <265-280>和小鼠黑色素瘤TRP2_ <180-188>均与HSC70融合在一起，并且类似的分析表明，与单独使用TRP2_ <180-188>的情况相比，产生IFNγ的细胞数量增加了2-4倍。也就是说，即使MHC限制即使对于异性助是表位也一致，敏化的CD8^+T细胞的数量也会增加。

项目成果

Sano I.et al.: "Prolonged survival of rat cardiac allograft with proinflammatory cytokine inhibitor"J. Heart Lung Transplant.. 20. 583-589 (2001)

Sano I.等人：“用促炎细胞因子抑制剂延长大鼠同种异体心脏移植物的存活”J。

Murata, S. et al.: "Immunoproteasome assembly and antigen presentation in mice lacking both PA28α and PA28β"EMBO J. 20. 5898-5907 (2001)

Murata, S. 等人：“缺乏 PA28α 和 PA28β 的小鼠中的免疫蛋白酶体组装和抗原呈递”EMBO J. 20. 5898-5907 (2001)

Levey, D.L.et al.: "Identification of a tumor-associated contact-dependent activity which reversibly downregulates cytolytic function of CD8+ T cells"Cancer Immunity. 1. 5-17 (2001)

Levey, D.L. 等人：“鉴定肿瘤相关的接触依赖性活性，该活性可逆地下调 CD8 T 细胞的溶细胞功能”癌症免疫。

Udono, H. et al.: "Generation of cytotoxic T lymphocytes by MHC class I ligands fused to heat shock cognate protein 70 (hsc7O)"Int. Immunol. 13. 1233-1242 (2001)

Udono, H. 等人：“通过与热休克同源蛋白 70 (hsc7O) 融合的 MHC I 类配体生成细胞毒性 T 淋巴细胞”Int。