慢性骨髄性白血病の原因因子Bcr-Ablの標的蛋白質Dokの機能解析

慢性粒细胞白血病致病因子Bcr-Abl靶蛋白Dok的功能分析

基本信息

批准号：
10152212
负责人：
山梨裕司
金额：
$ 3.2万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

慢性骨髄性白血病の癌細胞中で極めて強くチロシンリン酸化されている蛋白質、p62は多種多様なチロシンキナーゼの共通基質でもある。代表者とバルチモアはp62をPH、PTB領域を持つドッキング蛋白質Dokとして同定し,既にそのノックアウトマウスも作成している。本年度は、Dokの機能解析通じて以下の成果を得た。1) Srcキナーゼのトランスフォーメーション活性はDokの過剰発現により約四分の一に抑制された。PTB領域に導入した点変異によりこの抑制活性が阻害されることからDokはSrcによる細胞の癌化をそのPTB領域を利用して抑制できることが示唆された(バルチモアらとの共同研究)。2) in situ hybridization法により血球系細胞と軟骨細胞でのdokの高い発現が認められ、少なくともリンパ球ではDok蛋白質の高い発現も確認された。そこでBCR刺激後のDokのチロシンリン酸化について検討したところ、Dokは抗IgM抗体による刺激後二分以内に極めて強くリン酸化された。また、BCR/FcgRIIBを同時に刺激すると、Dokのチロシンリン酸化がさらに亢進した。BCR/FcgRIIB刺激ではDok欠損によりB細胞の増殖能が回復したが、BCR単独刺激ではDokの有無によらず同程度の増殖を示した(成内らとの共同研究)。このことから、DokはFcgRIIBを介する増殖抑制の情報伝達に必須の分子と考えられた3) Dokの細胞接着刺激によるチロシンリン酸化について検討したところ、ファイブロネクチンやポリ-L-リジンの刺激により強くリン酸化された。しかし、これらの細胞接着刺激によるDokのチロシンリン酸化がSrc欠損細胞では極端に低下していることから、細胞接着刺激によりSroがDokをリン酸化することが示唆された(野口、的崎、春日らとの共同研究)。

p62是一种在慢性髓样白血病的癌细胞中极强酪氨酸磷酸化的蛋白质，也是多种酪氨酸激酶的常见底物。代表和巴尔的摩已经将p62确定为具有pH和PTB区域的对接蛋白DOK，并且已经创建了敲除小鼠。今年，我们通过对DOK的功能分析实现了以下结果。 1）通过DOK的过表达，SRC激酶的转化活性减少了大约四分之一。这种抑制活性被引入PTB区域的点突变所抑制，这表明DOK可以使用PTB区域（与Baltimore等人的合作）抑制由SRC引起的细胞癌。 2）通过原位杂交在血细胞系和软骨细胞中观察到DOK的高表达，并且在淋巴细胞中也至少证实了DOK蛋白的高表达。因此，我们研究了BCR刺激后DOK的酪氨酸磷酸化，并发现在用抗IGM抗体刺激后两分钟内，DOK非常强烈地磷酸化。此外，BCR/FCGRIIB的刺激进一步增强了DOK的酪氨酸磷酸化。 BCR/FCGRIIB刺激恢复了由于DOK缺乏引起的B细胞的增殖能力，但是BCR单独刺激表现出相似的增殖，无论是否存在DOK（与Nariuchi等人的协作）。因此，DOK被认为是通过FCGRIIB3）通过DOK的细胞粘附刺激通过FCGRIIB3）酪氨酸磷酸化来传播增殖的必不可少的，并且通过刺激纤连蛋白和多酰胺的刺激来强烈磷酸化。然而，由于SRC缺陷型细胞中通过细胞粘附刺激对DOK的酪氨酸磷酸化极大地降低，因此有人提出SRO通过细胞粘附刺激（与Noguchi，Matazaki，Kasuga，Kasuga等人的协作研究）磷酸化DOK。