Bcr-Abl下流のrasGAP結合蛋白質Dok及びDok-2と慢性骨髄性白血病

Bcr-Abl 下游的 rasGAP 结合蛋白 Dok 和 Dok-2 与慢性粒细胞白血病

基本信息

批准号：
12215026
负责人：
山梨裕司
金额：
$ 3.01万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12215026/
关键词：
慢性骨髄性白血病 Bcr-Abl Dok Dok-2 rasGAP チロシンキナーゼ

项目摘要

Dokは、チロシンキナーゼ活性を持つ癌遺伝子産物の基質であり、PH、PTBドメインを持つドッキング蛋白質である。また、Dokとその類縁蛋白質Dok-2はヒト慢性骨髄性白血病(CML)の血液幹細胞中で強くチロシンリン酸化される。前年度の研究から、我々はDokがB細胞の増殖とMAPキナーゼに抑制性のシグナル分子であることを発見し、それがCML発症にも抑制的に機能していると予想した。本年度は、CMLのモデル系を適用するために、Dok/Dok-2のノックアウトマウスを樹立するとともに、Srcによるトランスフォーメーションを指標に、Dokによる癌化抑制の機序を検討した。1.Dok-2及びDok/Dok-2二重ノックアウトマウスは、生後6ヶ月までは見かけ上異常なく成長した。両者とも、8週齢での血液細胞の構成にも異常は認められなかったが、6ヶ月齢ノックアウトマウスにはリンパ組織の過形成が多く認められた。現在、この過形成の成因について解析を進めるとともに、CMLのモデルマウスであるbcr-ablトランスジェニックマウスとの交配を進めている。2.DokはSrcによる細胞のトランスフォーメーションを抑制するが、カルボキシ端から364番目までの欠失変異体(Dok-363)はその抑制能を保持していた。しかし、さらに27アミノ酸欠失したDok-336はその抑制能を失った。この27アミノ酸にはrasGAP SH2の標的配列があり、実際、Dok-363はrasGAPと会合し、Dok-336は会合しなかった。また、Srcによるチロシンリン酸化を受けないような点変異体はその抑制能もrasGAPとの会合能も失った。以上の知見から、Dokはチロシンリン酸化されることでrasGAPをリクルートし、Ras/MAPキナーゼを阻害することでトランスフォーメーションを抑制するのではないかと考え、解析を続けている。

Dok 是具有酪氨酸激酶活性的癌基因产物的底物，并且是具有 PH 和 PTB 结构域的对接蛋白。此外，Dok 及其相关蛋白 Dok-2 在人类慢性粒细胞白血病 (CML) 血液干细胞中被强烈酪氨酸磷酸化。通过去年的研究，我们发现Dok是一种抑制B细胞增殖和MAP激酶的信号分子，我们预计它在CML的发展中也能发挥抑制作用。今年，为了应用CML模型系统，我们建立了Dok/Dok-2基因敲除小鼠，并以Src诱导的转化为指标，研究了Dok诱导的癌症抑制机制。 1.Dok-2和Dok/Dok-2双敲除小鼠生长至6月龄均无明显异常。 8周龄时，两只小鼠的血细胞组成均未观察到异常，但6个月龄的敲除小鼠中观察到淋巴组织增生。我们目前正在分析这种增生的原因，并正在进行与 bcr-abl 转基因小鼠（CML 模型小鼠）的杂交。 2.Dok抑制Src诱导的细胞转化，并且从羧基末端到位置364的缺失突变体(Dok-363)保留了这种抑制能力。然而，多了27个氨基酸缺失的Dok-336失去了抑制能力。这27个氨基酸含有rasGAP SH2的靶序列，事实上，Dok-363和Dok-336并没有与rasGAP结合。此外，不经历Src酪氨酸磷酸化的点突变体失去了抑制酪氨酸磷酸化的能力以及与rasGAP关联的能力。基于上述发现，我们认为Dok通过酪氨酸磷酸化招募rasGAP，并通过抑制Ras/MAP激酶来抑制转化，我们正在继续分析这一想法。