B細胞抗原受容体を介した細胞内情報伝達と免疫寛容の分子機構
B细胞抗原受体介导的细胞内信号转导和免疫耐受的分子机制
基本信息
- 批准号:05272206
- 负责人:
- 金额:$ 1.6万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
- 财政年份:1993
- 资助国家:日本
- 起止时间:1993 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
1.WEHI-231細胞のアポトーシスに対するLynキナーゼの関与について知る為に、IPTGの添加により発現が抑制されるオペレーター・プロモーターの下流に活性化型lyn cDNAを組み込んだ。しかしながら、IPTG添加のみのWEHI-231細胞に対する影響を調べたところ弱いながらも増殖阻害活性のあることが判明し、現在至適条件の検討を行っている。また、WEHI-231細胞に無害と思われるテトラサイクリンにより発現抑制の可能な系も併せて検討している。2.野性型・活性化型lyn cDNAを免疫グロブリンエンハンサー、SV40プロモーターの制御下で発現するトランスジェニックマウスに関しては、一部にウイルスの感染が認められた為、帝王切開によるSPF化を行い、少なくとも一系統ずつのSPFトランスジェニックマウスを樹立し解析を続けている。3.lyn遺伝子欠損マウス樹立の為にマウスlyn遺伝子の単離を行ったところ、ゲノム上のlyn遺伝子に対応する領域として、塩基配列上極めて相同性の高い二つの領域が見い出された。また、両領域を識別し得るプライマーを用いてB細胞のhnRNAに対するRT-PCRを行い、転写活性のあるlyn遺伝子を同定した。すでに、lyn遺伝子のエクソン2-4を含むゲノムDNAを用いて遺伝子破壊ベクターを構築し、ES細胞に導入している。4.B細胞受容体刺激直後にチロシンリン酸化される蛋白質の同定に関しては、6.4×10^9個のヒトDaudi B細胞から抗フォスフォチロシン抗体を用いて精製された75kd蛋白質の部分アミノ酸配列を決定し、血球系細胞特異的に発現する細胞内蛋白質HS1がB細胞受容体刺激直後に最も強くチロシンリン酸化される分子であることを発見した。
1。为了了解Lyn激酶参与细胞细胞凋亡,将活化的Lyn cDNA纳入了操作员启动子的下游,这被IPTG的添加抑制了。但是,仅对IPTG添加的IHI-231细胞对IHI-231细胞的影响,事实证明它很弱,但具有增殖抑制活性,目前正在检查条件条件。另外,除了可以抑制的表达外,还考虑了被认为对细胞无害的WeHi-231细胞。 2。关于在免疫球蛋白手的控制下表达野生 /活性lyn cDNA的转基因小鼠,SV40启动子已观察到病毒感染,因此至少将剖腹产转化为SPF转基因小鼠。建立并继续进行分析。 3。液缺乏小鼠的lyn基因。此外,使用可以鉴定两个区域的底漆对B细胞的HnRNA进行B细胞的RT-PCR,并鉴定出具有转录活性的LYN基因。已经建立并引入了含有LYN基因外显子2-4的基因组DNA。 4.B细胞受体关于刺激后立即氧化的蛋白质,从6.4×10^9的6.4×10^9抗蛋白抗体纯化了75KD的氨基酸序列,从6.4×10^9纯化。在细胞蛋白中,HS1是B细胞受体刺激后立即氧化的最强酪氨酸蛋白的分子。
项目成果
期刊论文数量(6)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Yuji Yamanashi: "Activation of src-like protein-tyrosive kinase Lyn and its assucintion with phospha tidylinositsl-3 kinase upon β cell antigen receptor-mediated signalisy." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 89. 1118-1122 (1992)
Yuji Yamanashi:“src 样蛋白酪氨酸激酶 Lyn 的激活及其与 β 细胞抗原受体介导的信号传导的磷酸 tidylinositsl-3 激酶的关联。”Proc.Natl.Acad.Sci.USA。 )
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- 发表时间:
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- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Yuji Yamanashi: "Association of β cell antigen receptor with a protein-tyrosiac kinase Lyn." Science. 251. 192-194 (1991)
Yuji Yamanashi:“β 细胞抗原受体与蛋白质酪氨酸激酶 Lyn 的关联。科学”251。192-194(1991)
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Yuji Yamanashi: "Identification of HS1 protein as a mejor substrate of protein-tyrosiac kinase(s) upon β cell antigen receptor-mediated signalisy." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 90. 3631-3635 (1993)
Yuji Yamanashi:“鉴定 HS1 蛋白是 β 细胞抗原受体介导的信号传递中的蛋白酪氨酸激酶的主要底物。”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90. 3631-3635 (1993)
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