免疫シグナル伝達におけるrasGAP結合蛋白質Dok及びDok-2の機能解析

rasGAP结合蛋白Dok和Dok-2在免疫信号转导中的功能分析

基本信息

批准号：
13037013
负责人：
山梨裕司
金额：
$ 3.71万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

申請者らは、多様なチロシンキナーゼの共通基質であるrasGAP結合蛋白質p62をドッキング蛋白質Dokとして同定し、独自に樹立したDok欠損マウスを用いてB細胞抗原受容体下流で負のシグナル伝達に機能していることを発見した。申請者らの従前の研究によって、Dokとその類縁分子であるDok-2の二重欠損マウスにおいて白血球の過形成による脾臓の腫脹が頻発し、末梢血の白血球成分が増加することが明らかとなった。そこで申請者は、Dok、Dok-2の免疫シグナル伝達における機能と作用機序の解明を目的として、それらの二重欠損マウスにおける増殖抑制機構を検討した。まず、二重欠損マウスにおいて異常増殖を呈する細胞種を特定したところ、末梢血では顆粒球と単球の増加が、骨髄、脾臓ではそれらの前駆細胞の増加が認められた。そこで、骨髄球と顆粒球の産生に重要な造血幹細胞数についてコロニー法にて解析したところ、顆粒球・単球系の幹細胞が顕著に増加していることが判明した。さらに、顆粒球・単球系の幹細胞分化、増殖に重要なサイトカインに対する血液細胞の増殖応答を調べたところ、それら全てにおいてDok、Dok-2二重欠損による増殖応答の亢進が認められた。他方、詳細な病理学的解析によってDok、Dok-2二重欠損マウスの多くに糸球体腎炎の発症が認められた。この腎炎には免疫グロブリンの沈着が認められたことから自己免疫疾患であることが示唆された。以上の結果から、Dok及びDok-2は多様な免疫担当細胞の増殖と機能を負に制御していることが判明した。現在、この抑制の分子機構について会合蛋白質の探索とその機能解析を中心に検討すると共に自然免疫及び獲得免疫に対するDok、Dok-2欠損の影響を詳しく検討している。

申请人将rasGAP结合蛋白p62（多种酪氨酸激酶的常见底物）鉴定为对接蛋白Dok，并使用独立建立的Dok缺陷小鼠，证明其在B细胞抗原受体下游负信号转导中发挥作用我发现了申请人之前的研究表明，双重缺乏Dok和相关分子Dok-2的小鼠经常会因白细胞增生而出现脾脏肿胀，并且外周血中的白细胞成分增加。因此，为了阐明Dok和Dok-2在免疫信号转导中的功能和作用机制，申请人研究了Dok和Dok-2双缺陷小鼠的生长抑制机制。首先，他们鉴定了双缺陷小鼠中表现出异常增殖的细胞类型，并发现外周血中粒细胞和单核细胞增加，以及骨髓和脾脏中其前体细胞增加。因此，当我们使用集落法分析对生成粒细胞和粒细胞很重要的造血干细胞的数量时，我们发现粒细胞/单核细胞干细胞显着增加。此外，当我们检查血细胞对对粒细胞/单核干细胞分化和增殖很重要的细胞因子的增殖反应时，我们发现由于Dok和Dok-2的双重缺陷，所有这些细胞的增殖反应都增强。另一方面，详细的病理分析显示，许多Dok和Dok-2双缺陷小鼠出现了肾小球肾炎。该肾炎中存在免疫球蛋白沉积表明这是一种自身免疫性疾病。上述结果表明Dok和Dok-2负向调节多种免疫活性细胞的增殖和功能。目前，我们正在研究这种抑制的分子机制，重点是寻找相关蛋白并分析其功能，并详细研究Dok和Dok-2缺陷对先天免疫和适应性免疫的影响。