免疫シグナル伝達におけるrasGAP結合蛋白質Dok及びDok-2の機能解析

rasGAP结合蛋白Dok和Dok-2在免疫信号转导中的功能分析

基本信息

批准号：
13037013
负责人：
山梨裕司
金额：
$ 3.71万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

申請者らは、多様なチロシンキナーゼの共通基質であるrasGAP結合蛋白質p62をドッキング蛋白質Dokとして同定し、独自に樹立したDok欠損マウスを用いてB細胞抗原受容体下流で負のシグナル伝達に機能していることを発見した。申請者らの従前の研究によって、Dokとその類縁分子であるDok-2の二重欠損マウスにおいて白血球の過形成による脾臓の腫脹が頻発し、末梢血の白血球成分が増加することが明らかとなった。そこで申請者は、Dok、Dok-2の免疫シグナル伝達における機能と作用機序の解明を目的として、それらの二重欠損マウスにおける増殖抑制機構を検討した。まず、二重欠損マウスにおいて異常増殖を呈する細胞種を特定したところ、末梢血では顆粒球と単球の増加が、骨髄、脾臓ではそれらの前駆細胞の増加が認められた。そこで、骨髄球と顆粒球の産生に重要な造血幹細胞数についてコロニー法にて解析したところ、顆粒球・単球系の幹細胞が顕著に増加していることが判明した。さらに、顆粒球・単球系の幹細胞分化、増殖に重要なサイトカインに対する血液細胞の増殖応答を調べたところ、それら全てにおいてDok、Dok-2二重欠損による増殖応答の亢進が認められた。他方、詳細な病理学的解析によってDok、Dok-2二重欠損マウスの多くに糸球体腎炎の発症が認められた。この腎炎には免疫グロブリンの沈着が認められたことから自己免疫疾患であることが示唆された。以上の結果から、Dok及びDok-2は多様な免疫担当細胞の増殖と機能を負に制御していることが判明した。現在、この抑制の分子機構について会合蛋白質の探索とその機能解析を中心に検討すると共に自然免疫及び獲得免疫に対するDok、Dok-2欠損の影響を詳しく検討している。

申请人将RasGAP结合蛋白p62（一种用于多种酪氨酸激酶的常见底物）确定为对接蛋白DOK，并发现它使用独特的DOK缺乏型小鼠在B细胞抗原受体下游的阴性信号下起作用。申请人先前的研究表明，在双重缺乏DOK及其相关分子DOK-2的小鼠中，由于白细胞增生而引起的脾脏肿胀，外周血中的白细胞成分增加。因此，申请人研究了双缺陷小鼠中生长抑制的机制，目的是阐明DOK和DOK-2在免疫信号传导中的作用和作用机理。首先，当鉴定出双缺陷小鼠中表现出异常增殖的细胞类型时，外周血中的粒细胞和单核细胞增加，骨髓和脾脏中这些祖细胞的增加。因此，当使用菌落法分析造血细胞的数量，对于骨髓细胞和粒细胞的产生很重要时，发现粒细胞和单核细胞的数量显着增加。此外，当我们研究了血细胞对细胞因子对干细胞分化和粒细胞和单核细胞增殖至关重要的增殖反应时，我们发现所有这些结果中的DOK和DOK-2双缺陷会增加增殖反应。另一方面，详细的病理分析揭示了许多DOK和DOK-2双缺陷小鼠的肾小球肾炎的发展。这种肾炎已通过免疫球蛋白沉积物观察到，这表明它是一种自身免疫性疾病。以上结果表明，DOK和DOK-2负调节各种免疫反应性细胞的增殖和功能。目前，我们正在研究这种抑制的分子机制，重点是寻找相关的蛋白质及其功能分析，并研究了DOK和DOK-2缺乏症对先天和获得的免疫力的影响。