癌遺伝子による遺伝子の発現・複製制御の研究-ヒトパピローマウイルスを中心として

癌基因的基因表达和复制控制研究——以人乳头瘤病毒为中心

基本信息

批准号：
63010036
负责人：
伊藤嘉明
金额：
$ 10.69万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒトパピローマウイルス(HPV)による発がん機構をトランスアクチベーションの立場から解明する事を目的とし本年度は以下の結果を得た。HPV16及び18の転写産物のクローニングを行い、トランスフォーミング活性のあるcDNAクローンを同定しE6/E7遺伝子の重要性が認識された(角川・伊藤)。またヒト皮膚ケラチノサイトをHPV16で不死化して数種類の細胞株を得た(安本)。近畿在住患者の子宮頸癌細胞より新型のHPV52bが分離された(伊藤)。HPV16・E7と構造・機能のよく似たアデノウイルスE1Aについては、遺伝子上流の制御領域とそこに結合するトランス活性化因子の解析が行われ計21ヶ所の因子結合部位が同定された(藤永)。マウス未分化細胞株F9ではE1A様の遺伝子が発現していると考えられておりその細胞性遺伝子クローニングの準備としてアデノウイルスE3プロモーターの下流にメトトレキセート耐性遺伝子を接続したプラスミドを細胞に導入し1コピーのE1A遺伝子の導入で細胞がメトトレキセート耐性になる系が確立された(石橋)。アデノウイルスDNA上で、NFIが結合していない場合だけNFIII結合部に結合できる因子がマウス腎臓に検出されNFKと命名された(永田)。ポリオーマウイルス・エンハンサーに結合するトランス活性化因子PEBP1・2・3・4・5が同定され解析が進んでいる(佐竹・伊藤)。PEBP3は精製され、分子量30K〜35K(α)、と20K〜25K(β)の2種のサブユニットからなるヘテロダイマーである事が判明した(永井)。PEBP2を脱リン酸化するとPEBP3が出現するがHa-rasでトランスフォームした細胞で主としてPEBP3が存在するので、Cキナーゼがdown regulate されているものと考えられる(佐竹)。癌遺伝子c-skiと関連するsnoA、snoNがクローン化され、それらがDNA結合性の蛋白を作る事が示された(石井)。

今年获得了以下结果，目的是从反式激活的角度阐明由人乳头瘤病毒（HPV）引起的致癌机制。将HPV16和18的转录本克隆为鉴定转化活性cDNA克隆，并且识别E6/E7基因的重要性（Kadokawa和ITO）。此外，用HPV16使人皮肤角质形成细胞永生，以获得多种细胞系（YAMOTO）。从Kinki（ITO）的患者的宫颈癌细胞中分离出一种新型的HPV52B。对于具有与HPV16和E7相似的结构和功能的腺病毒E1A，对基因上游的调节区域和结合其结合的反式激活剂的分析，确定了总共21个因子结合位点（Fujinaga）。人们认为，小鼠未分化的细胞系F9表达了一个类似E1a的基因，为了准备细胞基因克隆，将与甲氨蝶呤耐药性基因相关的质粒在腺病毒E3启动子的下游下游引入细胞中，并建立了一个允许细胞通过引入甲基甲基甲基甲基抗体的系统，将其引入细胞中，并将其引入。在腺病毒DNA上，只有在小鼠肾脏未检测到NFI并被称为NFK（Nagata）时，才能与NFIII结合的因子。已经确定了与多瘤病毒增强子结合的反式激活器PEBP1、2、3、4和5，并且已经进行了分析（SATAKE和ITO）。纯化pebp3并被发现是由两个亚基组成的异二聚体，分子量为30k-35k（α）和20K-25K（β）（nagai）。 PEBP2的去磷酸化会导致PEBP3出现，但由于PEBP3主要存在于HA-RAS转换的细胞中，因此人们认为C激酶被调节（SATAKE）。已经表明，与Oncogenes C-Ski相关的Snoa和Snon已被克隆，它们形成DNA结合蛋白（ISHII）。