癌遺伝子による遺伝子の発現・複製制御の研究-ヒトパピローマウイルスを中心として

癌基因的基因表达和复制控制研究——以人乳头瘤病毒为中心

基本信息

批准号：
63010036
负责人：
伊藤嘉明
金额：
$ 10.69万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒトパピローマウイルス(HPV)による発がん機構をトランスアクチベーションの立場から解明する事を目的とし本年度は以下の結果を得た。HPV16及び18の転写産物のクローニングを行い、トランスフォーミング活性のあるcDNAクローンを同定しE6/E7遺伝子の重要性が認識された(角川・伊藤)。またヒト皮膚ケラチノサイトをHPV16で不死化して数種類の細胞株を得た(安本)。近畿在住患者の子宮頸癌細胞より新型のHPV52bが分離された(伊藤)。HPV16・E7と構造・機能のよく似たアデノウイルスE1Aについては、遺伝子上流の制御領域とそこに結合するトランス活性化因子の解析が行われ計21ヶ所の因子結合部位が同定された(藤永)。マウス未分化細胞株F9ではE1A様の遺伝子が発現していると考えられておりその細胞性遺伝子クローニングの準備としてアデノウイルスE3プロモーターの下流にメトトレキセート耐性遺伝子を接続したプラスミドを細胞に導入し1コピーのE1A遺伝子の導入で細胞がメトトレキセート耐性になる系が確立された(石橋)。アデノウイルスDNA上で、NFIが結合していない場合だけNFIII結合部に結合できる因子がマウス腎臓に検出されNFKと命名された(永田)。ポリオーマウイルス・エンハンサーに結合するトランス活性化因子PEBP1・2・3・4・5が同定され解析が進んでいる(佐竹・伊藤)。PEBP3は精製され、分子量30K〜35K(α)、と20K〜25K(β)の2種のサブユニットからなるヘテロダイマーである事が判明した(永井)。PEBP2を脱リン酸化するとPEBP3が出現するがHa-rasでトランスフォームした細胞で主としてPEBP3が存在するので、Cキナーゼがdown regulate されているものと考えられる(佐竹)。癌遺伝子c-skiと関連するsnoA、snoNがクローン化され、それらがDNA結合性の蛋白を作る事が示された(石井)。

我们的目的是从反式激活的角度阐明人乳头瘤病毒（HPV）引起的致癌机制，今年我们获得了以下结果。我们克隆了 HPV16 和 18 的转录本，鉴定了具有转化活性的 cDNA 克隆，并认识到 E6/E7 基因（Kadokawa 和 Ito）的重要性。我们还用 HPV16 使人类皮肤角质形成细胞永生化，并获得了几种细胞系（Yasumoto）。从居住在近畿地区（伊藤）的一名患者的宫颈癌细胞中分离出一种新型 HPV52b。对于与HPV16/E7具有相似结构和功能的腺病毒E1A，进行了基因上游调节区和与其结合的反式激活因子的分析，总共鉴定了21个因子结合位点(Fujinaga)。小鼠未分化细胞系F9被认为表达E1A样基因，在准备克隆细胞基因时，将带有连接在腺病毒E3启动子下游的甲氨蝶呤抗性基因的质粒引入细胞中以产生一个A拷贝。通过引入E1A基因（Ishibashi），建立了细胞对甲氨蝶呤产生耐药性的系统。在小鼠肾脏中检测到一种只有当NFI不结合时才能与腺病毒DNA上的NFIII结合位点结合的因子，并将其命名为NFK（Nagata）。与多瘤病毒增强子结合的反式激活因子 PEBP1、2、3、4 和 5 已被鉴定并正在分析（Satake，Ito）。 PEBP3经纯化后发现是由两个亚基组成的异二聚体，分子量分别为30K至35K（α）和20K至25K（β）（Nagai）。当PEBP2去磷酸化时，出现PEBP3，并且由于PEBP3主要存在于用Ha-ras转化的细胞中，因此认为C-激酶被下调(Satake)。 snoA 和 snoN 与癌基因 c-ski 相关，已被克隆并显示可产生 DNA 结合蛋白 (Ishii)。