転写・複製制御因子の解析を中心にしたHPVによる発がん機構の研究

HPV引起的致癌机制研究，重点分析转录和复制控制因子

基本信息

批准号：
02262215
负责人：
伊藤嘉明
金额：
$ 8.96万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒトパピロ-マウイルス(HPV)16型の発がん遺伝子、E6,E7の産物は、それぞれがん抑制遺伝子産物、p53及びRbタンパクと結合し、それらの不活化する事により発がんに寄与するものと考えられている。p53はSV40DNA複製を阻害する。Rbは細胞がS期に入るのを阻害すると考えられており、cーfos遺伝子の発現を抑制すると報告されている。ポリオ-マウイルDNA複製はエンハンサ-により制御されているという点で得がたい実験系である。このエンハンサ-には転写因子AP1結合部位が1ケ所ある。AP1はプロトがん遺伝子cーjun,cーfos及びそれらと関連する遺伝子の産物からなる二量体である。AP1の複製制御における関与を調べるため、エンハンサ-のかわりにAP1結合部位のみを持つテストプラスミドを作成した。このプラスミドを内在性AP1活性の殆どないF9細胞に、cーjun,cーfosの発現ベクタ-と共にトランスフェクトしたところ、AP1結合部位を介して強い複製の活性化が起こり、複製起点近傍に存在する初期プロモ-タ-からの転写も強く活性化された。AP1結合配列のかわりに、よく似たCRE配列を用い、CREに結合するCREBの発現ベクタ-を用いたところ、初期プロモ-タ-からの転写はAP1の場合と同様に強く活性化されたが、複製の活性化は全く観察されなかった。これらの結果より、(1)AP1は転写のみならず複製の制御因子でもある、(2)転写と複製を同時に活性化できるのは転写因子の一般的性質でない、(3)AP1によ転写と複製の活性化機構はそれぞれ異なる、との結論を得た。cーfos,cーjunはCキナ-ゼを介するシグナル伝達系により活性化され、一方CREBはAキナ-ゼを介する伝達系により活性化される。DNA複製がよく知られたこの2つのシグナル伝達系の相互作用により、正負の制御を受けている可能性が示唆された。

人乳头瘤病毒 (HPV) 16 型癌基因的产物 E6 和 E7 被认为通过分别与肿瘤抑制基因产物 p53 和 Rb 蛋白结合并使它们失活而促进致癌。 p53 抑制 SV40 DNA 复制。 Rb 被认为可以抑制细胞进入 S 期，并且据报道可以抑制 c-fos 基因的表达。脊髓灰质炎病毒 DNA 复制是一种有利的实验系统，因为它受到增强子的调节。该增强子有一个转录因子 AP1 的结合位点。 AP1是由原癌基因c-jun、c-fos及其相关基因的产物组成的二聚体。为了研究 AP1 在复制控制中的参与，我们构建了一个仅包含 AP1 结合位点而不是增强子的测试质粒。当将该质粒与c-jun和c-fos表达载体一起转染到几乎没有内源AP1活性的F9细胞中时，通过AP1结合位点发生强烈的复制激活，并且来自早期启动子的转录也被强烈激活。当我们使用类似的 CRE 序列代替 AP1 结合序列和与 CRE 结合的 CREB 表达载体时，早期启动子的转录与 AP1 的情况一样被强烈激活，没有观察到复制激活。这些结果表明：（1）AP1不仅是转录的调节因子，而且是复制的调节因子；（2）同时激活转录和复制并不是转录因子的一般特性；（3）AP1是转录的调节因子我们得出的结论是，每个的复制激活机制都是不同的。 C-fos和c-jun由C-激酶介导的信号转导系统激活，而CREB由A-激酶介导的信号转导系统激活。有人提出，DNA 复制可能受到这两个众所周知的信号转导系统相互作用的正向和负向调节。