ポリオーマ大,中,小型T抗原の癌化における共同作用とそのオンコジレ研究への応用

多瘤大、中、小T抗原对癌化的协同作用及其在肿瘤学研究中的应用

基本信息

批准号：
60015042
负责人：
伊藤嘉明
金额：
$ 5.12万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1985
资助国家：
日本
起止时间：
1985 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ポリオーマウイルス癌遺伝子産物、大・中・小型T抗原のうち小型T抗原の機能に関する知見は今まで極端に少なかった。理由の一つは、小型T抗原のみを発現する細胞を今までどの研究室でも単離する事が出来なかった事である。我々はネオマイシン耐性遺伝子を組込んだレトロウイルスベクターに小型T抗原遺伝子を挿入し、これをパッケジング欠損変異を持つマウス白血病ウイルスゲノムを内在性に持つマウス細胞にトランスフェクトする事により、ヘルパーフリーの複製欠損RNAウイルスを得た。このウイルスをNIH3T3細胞に感染させ、G418耐性細胞を単離する事により小型T抗原のみを発現している細胞クローンを多数得た。これらの細胞を調べる事により、1.小型T抗原は主として核内に局在する事、2.アクチンケーブルには殆ど影響を及ぼさない事、3.32キロダルトンの細胞蛋白と結合している事、4.飽和密度に達したNIH3T3細胞の増殖を促す事、5.ごく微弱なアンカレッジ・インデペンデント増殖を促す作用のある事、6.ヌードマウスに腫瘍原性はない事等の知見を得た。次で小型T抗原と他のT抗原の間に共同作用があるかどうか調べ、現在まで予備的結果として、NIH3T3細胞で中型T抗原と共同的に働らく事が判明している。この結果は、小型T抗原の一次構造はC端の4個のアミノ酸を除くすべてが中型T抗原のN端半分と全く同一であるにも拘らず、小型T抗原は中型T抗原と全く別な独立の機能を持つ事を強く示唆する。我々の研究で明らかになった事の一つは、ポリオーマウイルスは核内に局在する産物を作る癌遺伝子を二種持つという点である。既知の核内局在型オンコジン産物も同様に二種に分類されるのかどうか、今後検討を加えたい。

到目前为止，对小型T抗原的功能，多瘤病毒癌基因产物，大型，中和小型T抗原的功能很少。一个原因之一是，到目前为止，仅在任何实验室中都无法在任何实验室中分离出小的T-抗原。我们将一个小的T-抗原基因插入掺入新霉素耐药基因的逆转录病毒载体中，并将其转染到内源性小鼠细胞中，并带有鼠白血病病毒基因组，带有包装不足的缺陷突变，从而获得了无辅助复制的无辅助复制不足的缺乏缺乏的RNA病毒。该病毒被NIH3T3细胞和分离的G418耐药细胞感染，以获得许多仅表达小T抗原的细胞克隆。通过检查这些细胞，我们获得了1。小型T抗原主要位于核中，2。它们对肌动蛋白电缆的影响很小，3。它们结合了3.32千达尔顿细胞蛋白，4。它们促进了NIH3T3细胞的增殖，它们的NIH3T3细胞的增殖已促进了饱和密度的非常弱的锚定效果，它们具有较弱的锚定，并构成了依赖性的，并构成了依赖性的成分，并构成了依赖性的成分，并促进了依赖性的成分。裸鼠。接下来，已经研究了小型T抗原和其他T抗原之间是否存在协作作用，并且作为初步结果，已经发现NIH3T3细胞与培养基T抗原合作工作。该结果强烈表明，小型T抗原具有与培养基T抗原完全独立且独立的功能，尽管除C端的四个氨基酸以外的所有氨基酸都与培养基T抗原的N末端半完全相同。在我们的研究中已经揭示的一件事是，多瘤病毒携带两种类型的癌基因，它们产生局部局部的产物。我们将来会考虑是否也可以将已知的核局部oncodin产品分为两种类型。