ポリオーマ大,中,小型T抗原の癌化における共同作用とそのオンコジレ研究への応用

多瘤大、中、小T抗原对癌化的协同作用及其在肿瘤学研究中的应用

基本信息

批准号：
60015042
负责人：
伊藤嘉明
金额：
$ 5.12万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1985
资助国家：
日本
起止时间：
1985 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ポリオーマウイルス癌遺伝子産物、大・中・小型T抗原のうち小型T抗原の機能に関する知見は今まで極端に少なかった。理由の一つは、小型T抗原のみを発現する細胞を今までどの研究室でも単離する事が出来なかった事である。我々はネオマイシン耐性遺伝子を組込んだレトロウイルスベクターに小型T抗原遺伝子を挿入し、これをパッケジング欠損変異を持つマウス白血病ウイルスゲノムを内在性に持つマウス細胞にトランスフェクトする事により、ヘルパーフリーの複製欠損RNAウイルスを得た。このウイルスをNIH3T3細胞に感染させ、G418耐性細胞を単離する事により小型T抗原のみを発現している細胞クローンを多数得た。これらの細胞を調べる事により、1.小型T抗原は主として核内に局在する事、2.アクチンケーブルには殆ど影響を及ぼさない事、3.32キロダルトンの細胞蛋白と結合している事、4.飽和密度に達したNIH3T3細胞の増殖を促す事、5.ごく微弱なアンカレッジ・インデペンデント増殖を促す作用のある事、6.ヌードマウスに腫瘍原性はない事等の知見を得た。次で小型T抗原と他のT抗原の間に共同作用があるかどうか調べ、現在まで予備的結果として、NIH3T3細胞で中型T抗原と共同的に働らく事が判明している。この結果は、小型T抗原の一次構造はC端の4個のアミノ酸を除くすべてが中型T抗原のN端半分と全く同一であるにも拘らず、小型T抗原は中型T抗原と全く別な独立の機能を持つ事を強く示唆する。我々の研究で明らかになった事の一つは、ポリオーマウイルスは核内に局在する産物を作る癌遺伝子を二種持つという点である。既知の核内局在型オンコジン産物も同様に二種に分類されるのかどうか、今後検討を加えたい。

在多瘤病毒癌基因产物大、中、小T抗原中，对于小T抗原的功能知之甚少。原因之一是迄今为止还没有实验室能够分离出仅表达小 T 抗原的细胞。我们将小T抗原基因插入含有新霉素抗性基因的逆转录病毒载体中，并将其转染到内源性携带有包装缺失突变的鼠白血病病毒基因组的小鼠细胞中，从而获得了无辅助复制的缺陷RNA病毒。通过用该病毒感染NIH3T3细胞并分离G418抗性细胞，我们获得了许多仅表达小T抗原的细胞克隆。通过检查这些细胞，我们发现 1. 小 T 抗原主要定位于细胞核； 2. 它对肌动蛋白束影响很小； 3. 它与 32 千道尔顿的细胞蛋白结合； 4. 我们得到了以下发现；：促进已达到饱和密度的NIH3T3细胞的增殖，5.具有促进非常弱的贴壁非依赖性增殖的作用，6.在裸鼠中不具有致瘤性。接下来，我们研究了小T抗原与其他T抗原之间是否存在协同作用，迄今为止，初步结果表明，小T抗原与中T抗原在NIH3T3细胞中具有协同作用。该结果表明，尽管小T抗原的一级结构与中T抗原的N端一半除了C末端的四个氨基酸之外完全相同，但强烈表明小T抗原与中T抗原完全不同。它具有独立的功能。我们的研究结果之一是，多瘤病毒有两个致癌基因，可产生位于细胞核内的产物。未来，我们想研究已知的核定位Oncodin产物是否可以类似地分为两类。