E3ユビキチンリガーゼを用いた新たな免疫制御法の試み

利用E3泛素连接酶尝试新的免疫控制方法

基本信息

批准号：
20060034
负责人：
石戸聡
金额：
$ 6.14万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、ウイルスMIRおよびMARCHのタンパク精製の方法の確立を目指したとともに、MIRを標的細胞へ導入出来るか否かの検討を行なった。MIR2はC末端にHisタグを付け精製する事が出来なかった。しかしながら、N末にmyc-FLAGタグを付けると精製する事が可能であった。従って、myc-HisのタグをN末に付け大量に精製出来る方法を模索している。さらに、MIR2はタンパク精製の段階でアグリゲーションを起こす為に、変性阻害剤の検討も行なって行かなければならない事が明らかとなった。MARCHの精製に関しては、MARCH-Iの精製法の確立を目指した。アミノ末端を欠損させる事によりMARCH-Iの発現が上昇する事が明らかとなり、機能も温存出来る事を見出した。さらに、C末端にHisタグを付ける事により、精製が可能である事も見出した。従って、MARCH-Iの応用にはアミノ末端欠損体を用いる事を目標とする。MIRタンパク質の導入の可能性に関して、基質蛋白質が発現しているB細胞株に、MIRがconstitutiveに発現している細胞を融合させることにより、MIRが融合先の細胞にて機能するか否かを検討した。c-MIRが発現している細胞に放射線照射を行ない不活性化を行ない、B7-2が発現している標的細胞にポリエチレングリコールにて融合させた。約4時間後にB7-2の発現が抑制されている事を確認した。不活性化した細胞にあるc-MIRにて抑制が確認された事から、さらに、c-MIRを含むミクロソームを用いて同様の検討を行なった。しかしながら、ミクロソームにては標的細胞におけるB7-2の発現を抑制することは出来なかった。これらめ事から、MIRをプロテオリポソームにて導入する必要がある事が明らかとなった。

今年，我们旨在建立一种蛋白质纯化病毒和三月的蛋白质纯化方法，还研究了是否可以将MIR引入靶细胞中。 Mir2无法通过他在C末端的标签纯化。但是，可以通过将MYC-FLAG标签连接在N端子上进行纯化。因此，我们正在寻求一种允许将myc-His标签连接到n端子的方法，以大量纯化。此外，已经揭示了为了在蛋白质纯化过程中引起miR2的聚集，还必须对其进行定性抑制剂进行研究。关于三月的净化，目的是为3月1日建立纯化方法。据表明，氨基末端的删除增加了三月1的表达，发现它也可以保留其功能。此外，发现可以通过将其标签附加到C末端来实现纯化。因此，目标是将氨基终端缺陷用于3月I应用。关于引入miR蛋白的可能性，我们研究了通过用B细胞蛋白表达底物蛋白的B细胞系组成型融合细胞进行融合靶标的miR功能。辐照表达C-MIR的细胞使细胞失活，然后将表达B7-2的靶细胞与聚乙烯乙二醇融合。已经确认B7-2表达大约4小时后被抑制。由于C-MIR在灭活细胞中证实了抑制，因此使用含有C-MIR的微粒体进行了相同的研究。但是，微粒体无法抑制靶细胞中B7-2的表达。这些结果表明，必须通过蛋白脂质体引入miR。

项目成果

期刊论文数量（15）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Hepatitis C Virus Infection Induces Apoptosis through a Bax-triggered, Mitochondoria-mediated, Caspase-3-dependent Pathway

丙型肝炎病毒感染通过 Bax 触发、线粒体介导、Caspase-3 依赖性途径诱导细胞凋亡

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
The Journal of Virology 9
影响因子：
0
作者：
Deng;L.;Adachi;T;Kitayama;K.;Bungyoku;Y.;Kitazawa;S.;Ishido;S.;Shoji;I..;and *Hotta;H.
通讯作者：
H.

ユビキチンによる新たな免疫制御機構

泛素的新免疫控制机制

DOI：
发表时间：
2009
期刊：
影响因子：
0
作者：
Matsumoto;M.;Taishin Akiyama;石戸聡
通讯作者：
石戸聡

Dendritic cell maintenance by MARCH-I through MHC II ubiqutination

MARCH-I 通过 MHC II 泛素化维持树突状细胞

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
Goto E;Mito-Yoshida M;Ue matsu M;Aoki M;Matsuki Y;Ohmura-Hoshino M;Hootta H;Miyagishi M;Ishido S.;星野真理;星野真理,松木洋平,吉田麻理,青木雅美,後藤栄治,石戸聡;後藤栄治,吉田麻理,青木雅美,松木洋平,星野真理,堀田博,石戸聡;Ishido S;Hoshino M . ,Matsuki Y . ,Yoshida M . ,Goto E . ,Aoki M . ,and Ishido S
通讯作者：
Hoshino M . ,Matsuki Y . ,Yoshida M . ,Goto E . ,Aoki M . ,and Ishido S

E3 ubiquitin for MHC molecules

MHC 分子的 E3 泛素

DOI：
发表时间：
2009
期刊：
Current Opinion in Immunology 21
影响因子：
0
作者：
Ishido S;Goto E;Matsuki Y;Ohmura-Hoshino M.
通讯作者：
Ohmura-Hoshino M.

MHC class IIのユビキチン化によるMRC class I発現の制御

MHC II 类泛素化对 MRC I 类表达的调节

DOI：
发表时间：
2009
期刊：
影响因子：
0
作者：
Deng;L.;Adachi;T;Kitayama;K.;Bungyoku;Y.;Kitazawa;S.;Ishido;S.;Shoji;I..;and *Hotta;H.;石戸聡;松木洋平;豊本雅靖;星野真理
通讯作者：
星野真理

DOI：
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DOI：
发表时间：
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DOI：
发表时间：
2007
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影响因子：
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作者：
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通讯作者：
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通讯作者：
石戸聡

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DOI：
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2004
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0
作者：
Ueta;M.;Nochi;T.;Jang;M-H.;Kawasaki;S.;Park;E-J.;Igarashi;O.;Hino;A.;Kawasaki;S.;Shikina;T.;Hiroi;T.;Kinoshita;S.;Kiyono;H.;石戸聡
通讯作者：
石戸聡