真核細胞RecQ相同遺伝子のDNA組み換え・減数分裂・染色体分離における役割

真核 RecQ 同源基因在 DNA 重组、减数分裂和染色体分离中的作用

基本信息

批准号：
08275205
负责人：
関政幸
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は出芽酵母SGSI遺伝子破壊二倍体株で胞子形成能の低下及び減数分裂時のDNA組み換え能の低下した現象をもとに本研究を進めている。また出芽酵母SGSlはDNAトポイソメラーゼIIIとも相互作用することから、酵母トボIIIについても平行して解析した。1)SGSlのDNAヘリカーゼ活性が出芽酵母の減少分裂に必須の役割を果たしているか調べるため、SGSl遺伝子破壊株がメチルメタンスルホン酸エステルの感受性があることを利用して変異SGSl遺伝子を作製した。具体的にはSgslのヘリカーゼモチーフのミスセンス変異を導入したメチルメタンスホン酸エステル感受性になった変異ヘリカーゼ遺伝子を選択できた。現在これらの変異SGSl遺伝子がSGSl遺伝子破壊株の低い胞子形成能を相補できるかテスト中である。2)出芽酵母SGSl遺伝子は胞子形成の際、転写レベルで誘導されることを見出した。つまり減数分裂の際、Rad51, 52蛋白と同様に誘導される酸素群の一員であった。3)出芽酵母SGSl蛋白質の遺伝子工学的産生に成功した。得られた蛋白質をもとに生化学的解析を開始するとともに、抗原としても利用しウサギポリクローナル抗体を得た。この抗体を用いてSgslの蛋白レベルでの発現を検討中である。4)出芽酵母トポIII変異株はその強いミュウテーター活性及び遅い増殖能のため、トポIIIの欠損が減数分裂で働いているか否かの判定は極めてむずかしい。そこで我々は条件によってトポIIIが欠損するような酵母二倍体をほぼ作製した。

我们基于酿酒酵母 SGSI 基因破坏的二倍体菌株减数分裂过程中产孢能力降低和 DNA 重组能力降低的现象进行这项研究。此外，由于酿酒酵母SGS1也与DNA拓扑异构酶III相互作用，因此还并行分析了酵母拓扑异构酶III。 1)为了研究SGS1的DNA解旋酶活性是否在酿酒酵母分裂减少中发挥重要作用，我们通过利用SGS1基因破坏的菌株对甲磺酸甲酯的敏感性来创建突变体SGS1基因。具体来说，我们能够通过在Sgsl的解旋酶基序中引入错义突变来选择对甲磺酸甲酯敏感的突变解旋酶基因。我们目前正在测试这些突变的SGS1基因是否可以补充SGS1基因破坏的菌株的低孢子形成能力。 2)我们发现酿酒酵母SGS1基因在孢子形成期间在转录水平被诱导。换句话说，它是减数分裂过程中诱导产生的氧基团的成员，类似于 Rad51 和 Rad52 蛋白。 3)成功基因工程生产酿酒酵母SGS1蛋白。我们根据获得的蛋白质进行生化分析，并将其作为抗原获得兔多克隆抗体。使用该抗体，我们目前正在蛋白质水平研究 Sgsl 的表达。 4)由于酿酒酵母topo III突变体的增变活性强且生长缓慢，确定topo III缺失是否在减数分裂中发挥作用极为困难。因此，我们在某些条件下产生了缺乏拓扑III的酵母二倍体。