真核細胞RecQヘリカーゼのかかわる新規DNA修復系の解析

涉及真核 RecQ 解旋酶的新型 DNA 修复系统的分析

基本信息

批准号：
08264202
负责人：
関政幸
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

出芽酵母RecQホモローグ、SGS1遺伝子破壊株がアルキル化剤に感受性である事実から本研究は出発している。またヒトに3つのRecQ遺伝子が存在し、高発癌性でしられるブルーム症候群(BLM)、早老症で知られるウエルナ-症候群(WRN)の原因遺伝子及び私が生化学的に同定したDNAヘリカーゼQ1遺伝子がある。本年度以下の実績をあげた。1)マウスの3つのRecQ相同遺伝子のクローニングを目指し、マウスBLM、WRN、Q1の3つとも全長のクローニング及び塩基配列の決定を終了した。また酵母SGS1はトポイソメラーゼIII (Top III)と物理的、遺伝学的に相互作用することから、マウスTop III遺伝子の全長クローニングを行い、塩基配列決定を終了した。2)既に以上の遺伝子について、マウス個体レベルでのそれぞれの遺伝子発現等を解析中である。マウスヘリカーゼQ1に関しては、胸腺及び精巣で高い発現を認めた。3)ヒトDNAヘリカーゼQ1に対する抗体を用いてQ1の細胞内局在を調べたところ、DNA複製の盛んな部位に局在していた。つまり「DNA複製にカップルしたDNA修復システムの存在」を可視化したと考えており、さらに詳しい研究を開始した。4)酵母SGS1遺伝子破壊株はアルキル化剤(MMS等)の他にDNA合成前駆体生成の阻害剤ヒドロキシ尿素(HU)にも感受性を見出した。Sgs1のヘリカーゼモチーフにミスセンス変異を導入したところMMS、HUに対して感受性になったのでSgs1蛋白質のDNAヘリカーゼ活性はこれらの傷の修復に必須であることを証明できた。5)出芽酵母SGS1遺伝子は細胞をMMS、HU処理した際、転写レベルで誘導されることを見出した。つまりDNA傷害により誘導されるDNA修復酵素の一員であった。

这项研究是从SGS1基因破坏菌株对烷基化剂敏感的事实中暴露的。此外，人类中有三个RECQ基因，Bloom综合征（BLM）可能是由高癌引起的，这是Wernna-Syndrome（WRN）的原因，以衰老而闻名，DNA解旋酶Q1基因由我。我们已经取得了今年的往绩。 1）瞄准三个小鼠中的三个ryst基因的克隆，所有三个小鼠BLM，WRN和Q1都完成了克隆和碱基序列。此外，酵母SGS1在总长度上执行了小鼠TOP III基因，并确定了底座序列由Toposomeraii III（TOP III）终止。 2）对于上述基因，我们正在分析小鼠个体水平的每个基因表达。关于小鼠解旋酶Q1，在胸腺和睾丸中发现了高表达。 3）使用人DNA解旋酶Q1的抗体检查Q1的细胞内部站，它位于DNA复制的繁荣部分。换句话说，我们认为将DNA修复系统的存在与DNA重复相结合，并开始了更详细的研究。 4）酵母SGS1基因破坏菌株在DNA合成妊娠的抑制剂（HU）中，在抑制剂（HU）中也对羟基尿素（HU）敏感。在SGS1直升机Zemotifi中引入了杂种学突变，并且对MMS和HU很敏感，因此SGS1蛋白的DNA解旋酶活性对于修复这些伤口至关重要。 5）当细胞为MMS并处理HU时，发现细菌酵母SGS1基因在转移水平上被引导。换句话说，他是DNA损伤诱导的DNA恢复酶的成员。