出芽酵母を用いたヒトDNAヘリカーゼ異常症の遺伝子診断法の開発

利用酿酒酵母开发人类 DNA 解旋酶疾病的遗传诊断方法

基本信息

批准号：
12770069
负责人：
鈴木貴夫
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770069/
关键词：
WRN BLM ヘリカーゼ遺伝子診断出芽酵母 RTS ストップコドンアッセイ法酵母

项目摘要

出芽酵母を用いたストップコドンアッセイ法*平成13年度新規に行った実験計画としては、ヒト臨床サンプル(末梢血単核球)よりの出芽酵母を用いた遺伝子診断をWRN遺伝子、BLM遺伝子に関してのクオリティーのチェックを行った。特にWRN遺伝子について、ヒト末梢血単核球からの診断に必要な充分量のcDNAが得られず計画は暗礁に乗り上げた。*この原因として、もともとWRN遺伝子の発現が末梢血単核球で極端に弱いこと.あるいはWRNmRNA自体の安定性の問題も考えられた。これに対する対処方法として、PCR法を用いてenrichするか、あるいは、患者さんよりの検体で、発現の高い臓器を選んで解析を行うなどの解決策を現在検討中である。出芽酵母を用いた機能的診断法*平成12年度に引き続きWRN遺伝子とBLM遺伝子のミスセンス変異の作製を行った。WRN遺伝子については、現在までに発病に関連があると思われるミスセンス変異はC末端の1例が報告されているに過ぎない。またBLM遺伝子については全疾思関連遺伝子の約3割がミスセンス変異であると言われており、その一部の作製に成功した。*酵母sgsl変異株への野生型と変異型のWRN遺伝子、8LM遺伝子、RTS遺伝子の導入実験により出芽酵母を用いた機能的遺伝子診断法の開発においては、一部、機能的変化をもたらした見えるフェノタイプを示したクローンも得られたが、今のところ、解析段階であり臨床応用には至っていない。また本研究費より得られた研究成果の一部を次項の論文として発表を行った。今後、更なる解析をすすめ出来るだけ早くの臨床応用を目指し鋭意研究中である。

使用饺子酵母*作为2001年新执行的实验计划停止Kodon分析法，我检查了我检查了我检查的人类临床样品（外周血核球形球形）WRN基因和我检查的BLM基因的遗传诊断。特别是，WRN基因无法获得足够的cDNA来从人类外周血单调球体中诊断，并且该计划在礁石上。 *原因是WRN基因的表达最初在外周血核球中极为弱。作为解决方案，我们目前正在考虑使用PCR方法富集等解决方案，或选择具有高表达的器官并从患者那里分析标本。使用饺子酵母*WRN基因和BLM基因的肌肉突变的功能诊断方法是在FY28中进行的。关于WRN基因，只有一个不当行为突变的病例似乎与迄今为止的发作有关。据说约有30％的BLM基因是杂物突变，其中一些是成功产生的。 *Hyti SGSL野生型和突变体WRN基因，8lm基因和RTS Gen Gen Gene在使用发芽酵母的功能基因诊断方法中的发展中，似乎已经获得了具有表型的克隆的功能变化，但是此刻它处于分析阶段，尚未达到临床应用。此外，在下一节中发表了从这项研究费用获得的一部分研究结果。将来，我们正在努力尽快追求进一步的临床应用。