ユビキチン系の制御を受けるDNA修復と誘導突然変異機構

泛素系统调控的DNA修复和诱导突变机制

• 批准号: 07255207
• 负责人: 瀬野 悍二
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07255207/
• 关键词: ユビキチン; ヌクレオチドプール; 細胞周期; 温度感受性変異; DNA合成; ユビキチン活性化酵素; 突然変異; マウス細胞株

ユビキチン活性化酵素E1温度感受性マウス細胞変異株tsFS20は非許容温度下、主としてS期に停止する。その際、in vivo DNA合成能が急速に低下するが、RNAおよび蛋白質合成能は正常であった。lysolecithin処理によるpermeabilized cellsを用いたin vitro DNA合成活性は正常であった。したがって、本変異株のDNA合成装置は基本的には損なわれていないことが示唆された。他方、非許容温度に16h培養した後の細胞内dNTP poolを測定したところ、dTTPの著しい低下がみられた。この現象は本変異株に特異的であった。したがって、ユビキチン系がde novoデオキシヌクレオチド代謝・合成経路の制御を通してS期進行に関与していることが示唆された。特に、リボヌクレオチド還元酵素を中心とした律速系がユビキチン化の標的である可能性が高い。本変異株はMNNGやUVに高感受性を示す一方、誘発突然変異頻度は逆に低下する。この表現型は、出芽酵母rad6(ユビキチン結合酵素UBC2の変異)の表現型に似ているが、その説明は今後の解析結果による。

泛素激活酶 E1 温度敏感小鼠细胞突变体 tsFS20 在非允许温度下主要停滞在 S 期。此时，体内DNA合成能力迅速下降，但RNA和蛋白质合成能力仍保持正常。使用溶血卵磷脂处理的透化细胞的体外 DNA 合成活性正常。因此，表明该突变株的DNA合成装置基本完整。另一方面，当我们在不允许的温度下培养 16 小时后测量细胞内 dNTP 池时，我们发现 dTTP 显着下降。这种现象是该突变株所特有的。因此，有人认为泛素系统通过从头调节脱氧核苷酸代谢和合成途径参与S期进展。特别是，以核糖核苷酸还原酶为中心的限速系统很可能是泛素化的目标。虽然该突变株对 MNNG 和 UV 表现出高度敏感性，但诱导突变的频率却降低了。这种表型与酿酒酵母rad6（泛素结合酶UBC2的突变）相似，但其解释将取决于未来的分析结果。

项目成果

T.Sudha: "Abnormal integrity of nucleolus associated with cell cycle arrest owing to the temperature-sensitive ubiquitin-activating enzyme E1" Chromosome Research. 3. 115-123 (1995)

T.Sudha：“由于温度敏感的泛素激活酶 E1，与细胞周期停滞相关的核仁完整性异常”染色体研究。

Y.Nagai: "Ubiquitin-activating enzyme,E1,is plosphorylated in mammalian cells by the protein kinase CDC2" Journal of Cell Science. 108. 2145-2152 (1995)

Y.Nagai：“泛素激活酶 E1 在哺乳动物细胞中被蛋白激酶 CDC2 多磷酸化”《细胞科学杂志》。