G2-M期における核小体解離のユビキチン経路による制御

泛素通路对 G2-M 期核仁解离的调节

• 批准号: 07458255
• 负责人: 瀬野 悍二
• 金额: --
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07458255/
• 关键词: ユビキチン; 核小体; 細胞周期; 温度感受性変異; マウス細胞株; 染色体異常; ユビキチン活性化酵素; 電子顕微鏡

ユビキチン活性化酵素の温度感受性変異株ts85は制限温度下細胞周期G2期に停止し、核小体が形態異常を引き起こした。本変異株のユニークな表現型を利用して核小体の代謝異常の分子機序とG2期停止を引き起こす事との因果関係の解析を試みた。核小体異常はG2期停止細胞に特異的であることを、細胞を予めG2あるいはS期に同調してから非許容温度培養する実験で示した。Cdc2キナーゼの温度感受性変異株tsFT210も非許容温度下G2期に停止するが、核小体異常はみられない。核小体異常の典型はド-ナッツあるいは馬蹄型への変形で、その中央領域に観察される星雲状の高電子密度粒子(70nm)領域にプロテアソーム、誘導型HSP70およびポリユビキチン化蛋白質が免疫細胞化学的に一致した。また、ポリユビキチン化蛋白質は免疫電子顕微鏡によっても同粒子と一致した。ちなみに、プロテアソームが核小体に終結する観察は初めてである。G2期停止後許容温度に戻してM期へ進行させたところ、M期に入ると直ちに起こる核小体の消失過程が阻害され、metaphaseにおいてNORが互いに癒着したままと解釈できる異常染色体像がみられた。70nm粒子の実体の解明が残された課題である。

泛素激活的酶温度敏感性变体TS85在低温细胞周期的降低温度下停止，导致核异常。我们试图使用该变量库存的唯一表达类型分析细胞核代谢异常的分子机制与G2项悬浮液之间的因果关系。在一个实验中显示了核异常特有的核异常是特异性的，在该实验中，细胞在G2或S期间提前同步，然后不耐耐受温度培养。 Cdc2激酶的温度敏感突变体TSFT210也停止在非耐受性温度下，但未观察到核异常。典型的核异常的变形为坚果或马蹄类型，蛋白质体诱导的Hsp70和多利维基化的蛋白是在中央区域观察到的星云形的高电子（70nm）区域的免疫细胞。多基型式型蛋白质也与免疫电子显微镜与颗粒一致。顺便说一句，这是蛋白酶以核结束的第一个观察结果。在停止G2周期后返回允许的温度后，将核核的夸张在进入M周期M时立即消失，并且可以解释为中期或中期。这是一个问题，阐明70nm颗粒的实体仍然存在。

项目成果

T.Sudha: "Abnormal integrity of uncleolus associated with cell cycle arres owing to the temperature-sensitive ubiquitin-activating enzyme E1" Chromosome Research. 3. 115-123 (1995)

T.Sudha：“由于温度敏感的泛素激活酶 E1，与细胞周期停滞相关的脐带异常完整性”染色体研究。

Y.Nagai: "Ubiquitin-activating enzyme,E1,is phosphorylated in mammalian cells by the protein kinase CDC2" Journal of Cell Science. 108. 2145-2152 (1995)

Y.Nagai：“泛素激活酶 E1 在哺乳动物细胞中被蛋白激酶 CDC2 磷酸化”《细胞科学杂志》。