細胞を異常増殖と癌形質発現に導く分子機構の体細胞変異株を用いた研究

利用体细胞突变体研究导致细胞异常增殖和癌性表达的分子机制

基本信息

批准号：
60010086
负责人：
瀬野悍二
金额：
$ 10.5万
依托单位：
Research Institute for Clinical Oncology, Saitama Cancer Center
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1985
资助国家：
日本
起止时间：
1985 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

癌細胞の自律増殖や悪性形質維持を決定する細胞内因子の遺伝的基礎を知るために、そのために分離した突然変異株とバイオテクノロジーの手法を駆使して以下の成果をおさめた。(1)ヒトの細胞周期関連増殖必須遺伝子のクローン化に成功し、増殖の調節機構を分子レベルで解明する端緒が開かれた。すなわち、【G_1】期の進行に関する約70キロ塩基対のDNA、【G_2】期の染色体凝縮を調節する約30キロ塩基対のDNA、およびDNA複製に必須なチミジル酸合成酵素の約23キロ塩基対のDNAで、いずれも生物活性を示した。DNAポリメラーゼαの遺伝子についてはクローン化に至らなかったが、遺伝子座をX染色体に決定した。(2)細胞周期におけるチミジル酸合成酵素遺伝子の発現様式を同遺伝子の上記クローン化断片をプローブにヒト正常2倍体線維芽細胞を用いて解析したところ、発現の調節は転写ではなく、転写以降のステップで行われていた。本成果は、癌遺伝子をはじめとする増殖関連遺伝子の今後の研究に新しい視点を与えるものである。(3)高温におくと染色体異常を誘発する突然変異株を分離した。この成果は、染色体の転座、欠失、増幅の機構を分子レベルで定量的に解析できることを約束する。(4)細胞の悪性化の指標とされる軟寒天内増殖が特定の未知増殖因子に依存することを、同因子に対する感受性の低下した癌細胞突然変異株の性状解析から解明した。本因子を同定するに至らなかったが、既知増殖因子はいずれも上記機能を代行できない。(5)インシュリン受容体欠損変異株の解析から、インシュリン様第1因子の受容体がその代行をすることを解明した。この成果は、増殖因子相互の生体内における役割の解明につながる。(6)悪性化増殖因子-β(TGF-β)に感受性を増し、ヌードマウスでの造腫瘍性も増した形質膜異常変異株を分離したが、前癌状態のモデルとして興味深い。今後(3)〜(6)についても遺伝子をクローン化し、情報発現機構を解明する。

为了了解决定癌细胞自主生长和恶性特征维持的细胞内因子的遗传基础，我们充分利用我们分离的突变株和生物技术技术，取得了以下成果。（1）成功克隆人类细胞周期相关增殖必需基因，为从分子水平阐明增殖调控机制打开了大门。即，[G_1]大约70 kilobase对的DNA与阶段进展相关，[G_2]大约30 kilobase对的DNA在阶段期间调节染色体浓缩，以及大约23 kilobase的胸苷酸合酶，这两者对于DNA复制都是必需的。配对的DNA显示出生物活性。尽管DNA聚合酶α的基因尚未被克隆，但该基因位点被确定位于X染色体上。 (2)当我们以上述基因的克隆片段为探针，分析正常人二倍体成纤维细胞中胸苷酸合酶基因在细胞周期中的表达模式时，我们发现表达不是由转录调控的，而是在转录后调控的。是分步骤完成的。这一结果为未来包括癌基因在内的增殖相关基因的研究提供了新的视角。 (3)我们分离出一种在高温下会诱导染色体异常的突变菌株。这一结果有望在分子水平上定量分析染色体易位、缺失和扩增的机制。 (4)我们通过分析对同一因子敏感性降低的癌细胞突变体的特征，阐明了作为细胞恶性指标的软琼脂中的增殖依赖于特定的未知生长因子。尽管我们还无法识别该因子，但已知的生长因子均无法发挥上述功能。 (5)对胰岛素受体缺陷突变株的分析表明，胰岛素样因子1的受体代表其发挥作用。这一结果将有助于阐明体内生长因子的相互作用。 (6)我们分离出一种质膜异常突变株，该突变株对恶性生长因子-β(TGF-β)的敏感性增加，并且在裸鼠中的致瘤性增加，这作为癌前状态的模型是很有趣的。未来，我们将克隆（3）至（6）的基因并阐明信息表达机制。