TS遺伝子の発現を指標にした細胞周期調節遺伝子の分子遺伝学的研究

以TS基因表达为指标的细胞周期调控基因的分子遗传学研究

基本信息

批准号：
62615524
负责人：
瀬野悍二
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Research Institute for Clinical Oncology, Saitama Cancer Center
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ヒトthymidylate synthase(TS)遺伝子の全構造決定:ヒトDNAライブラリーから得た約12.5キロ塩基対(kb)及び17.5kbのTS遺伝子断片クローンは7kbにわたって重複し, 両断片が占める約23kbの中に生物活性をもつTS遺伝子が存在した. その全塩基配列を決定した結果, ヒトTS遺伝子は7個のエクソンからなり, プロモーターを含むと考えられる転写開始領域から5′側上流数百塩基対までには, 転写制御エレメントであるTATA, CAAT, GCの諸ボックスは見つからなかった. 第3イントロンには約1.6kbにわたる翻訳配列と6塩基(GATGGTまたはGATGGA)を単位とする44回の反復配列が存在した. ちなみに, マウスTS遺伝子の構成は上記の第3イントロン及び第1と第7エクソンの非翻訳領域を除いてヒトのものと同じであった.2.ヒトTSミニ遺伝子の作製:上記成果をもとにTSミニ遺伝子を作製した. 第1エクソンの上流領域は約300塩基対あれば最小限の生物活性を示したが, 今回は上流領域約4kb, 第7エクソンの3′側下流領域1.7kbを用い, (1)イントロンを全く欠くもの, (2)第1イントロンのみをもつもの, (3)第2イントロンのみをもつものを作製した. TS欠損マウス細胞に導入して活性を測定したところ, (2)は対照のSV40プロモーター依存の発現ベクター組み込まれたTScDNAと同等の活性を示した. (3)は全く活性を示さなかったが, (1)は低いながら活性を示した.TS遺伝子の発現が転写後の段階で大きく制御されていることはすでに報告しているが, 今回のTS遺伝子5′側上流領域の構造決定からも, その発現調節機構は分化関連遺伝子のものと異なることが推測される. ミニ遺伝子を駆使した研究をさらにすすめ, 本研究課題の最終目的にせまりたい.

1.人胸苷酸合酶（TS）基因完整结构的测定：从人DNA文库中获得的约12.5kb和17.5kb的TS基因片段克隆重叠超过7kb，其中约23kb被这两个片段在人类TS基因中发现了具有生物活性的TS基因，在确定其完整核苷酸序列后，人类TS基因由七个外显子组成。 TATA、CAAT 和 GC 盒是转录控制元件，在转录起始区 5' 侧上游的数百个碱基对内没有发现，该区域被认为包括启动子。第三个内含子包含大约 1.6 kb 的翻译有 44 个序列重复和 6 个碱基（GATGGT 或 GATGGA）。小鼠TS基因的结构除第三内含子以及上述第一、第七外显子的非翻译区外与人类相同。 2.人TS小基因的构建：根据上述结果，构建了TS基因。我们创建了一个小基因。如果第一个外显子的上游区域约为 300 个碱基对，则显示出最小的生物活性，但这次我们使用了第 7 个外显子的约 4 kb 上游区域和 1.7 kb 3' 下游区域。我们创建了（1）一个缺乏任何内含子的细胞，（2）一个仅具有第一个内含子的细胞，以及（3）一个仅具有第二个内含子的细胞。当将其引入TS缺陷小鼠细胞并测量活性时，（2））显示了与整合到 SV40 启动子依赖性表达载体中的对照 TscDNA 具有相同的活性 (3)，但完全没有活性。 (1)显示出活性，尽管水平较低。虽然已经报道TS基因的表达在转录后阶段很大程度上受到调节，但目前TS基因5'上游区域的结构确定也结果表明，推测表达调控机制与分化相关基因的表达调控机制不同。我们希望进一步开展充分利用小基因的研究，以实现本研究项目的最终目标。