ユビキチン系酵素変異株を用いた哺乳類細胞の誘導性修復能の研究

利用泛素酶突变体研究哺乳动物细胞的诱导修复能力

基本信息

批准号：
06263214
负责人：
瀬野悍二
金额：
$ 1.15万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ユビキチン活性化酵素E1温度感受性変異株tsFS20は非許容温度下主としてS期に停止する。2.その際、in vivo DNA合成能が急速に低下するが、RNAおよび蛋白質合成能は正常であった。3.lysolecithin処理によるpermeabilized cellsを用いたin vitro DNA合成活性の測定によって、本変異株のDNA合成装置は基本的には損なわれていないことが示唆された。4.非許容温度に16h培養した後の細胞内dNTP poolを測定したところ、dCTPとdTTPの著しい低下がみられた。対照に用いたDNA polymerase aのts変異株tsFT20(S期停止)ではそのような低下はなかった。また、親株細胞をアフィデイコリン処理してDNA合成を阻害しても細胞内dNTP poolの低下はない。5.したがって、ユビキチン系がde novoデオキシヌクレオチド代謝・合成経路の制御を通してS期進行に関与していることが示唆された。特に、リボヌクレオチド還元酵素を中心とした律速系がユビキチン化の標的である可能性が高い。6.また、本変異株はMNNGやUVに高感受性を示す一方、誘発突然変異頻度は逆に低下する。この表現型は、出芽酵母rad6(ユビキチン結合酵素UBC2の変異)の表現型に似ている。7.しかし、本tsFS20株はE1酵素の変異株であり、複数のE2分子種へのユビキチン転送能が損なわれていることが十分考えられる。したがって、1-5)の表現型と6)の表現型の統一的な説明は今後の解析結果による。

1。泛素激活的酶E1温度敏感的突变剂TSFS20主要在非耐药性温度下在S期停止。 2。在这种情况下，在体内合成DNA的能力迅速降低，但是合成RNA和蛋白质的能力是正常的。 3。使用溶血石治疗的透化细胞测量体外DNA合成活性，表明该突变株的DNA合成装置基本上是完整的。 4。当在非耐药温度培养16小时后测量细胞内DNTP池时，DCTP和DTTP显着降低。 DNA聚合酶A使用对照的TS突变TSFT20（S阶段停滞）没有这种减少。此外，即使用近病胆碱治疗母细胞系以抑制DNA合成，细胞内DNTP池也没有降低。 5。因此，有人提出，泛素系统通过调节从头脱氧核苷酸的代谢和合成途径参与S期的进展。特别是，限速系统（主要是核糖核苷酸还原酶）很有可能是泛素化的靶标。 6。此外，尽管该突变体对MNNG和紫外线高度敏感，但相反，诱导突变的频率降低。该表型类似于发芽酵母Rad6的表型（泛素偶联酶UBC2的突变）。 7。但是，该TSFS20菌株是E1酶的突变菌株，并且很可能会损害其将泛素转移至多种E2分子物种的能力。因此，对1-5）和6）表型的统一解释是基于未来的分析结果。