ゴルジ体の遺伝変異と選別輸送の機構

高尔基体的遗传变异和选择性运输机制

基本信息

批准号：
04259222
负责人：
桑野信彦
金额：
$ 1.47万
依托单位：
大分医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

目的:ゴルジ領域における細胞の巧妙な選別輸送は驚嘆に値する。その選別の機構を把握するために我々はこの選別輸送の流れを止めたり変化させる哺乳類細胞の遺伝変異株を駆使して小胞体-ゴルジ複合体領域の輸送機序を明らかにしたいと考えた。そのために,ゴルジ体を標的とするモネンシンならびにブレフェルジンAに対して独立に単離した2種類の耐性遺伝変異株を対象にして以下の研究を進めることにした。1.モネンシン耐性で選択したマウスBalb/3T3由来のMO-5株は,上皮増殖因子(EGF)やウィルスのとりこみが欠損している。EGF受容体を対象にEGFのシグナル応答の細胞増殖に対する分子機序を検討する。2.ブレフェルジン耐性で選択したヒトKB細胞由来のKB/BFA-1株の単離に最近成功し,ゴルジ体の形態変化を観察しているのでこの株を用いてゴルジ体の細胞分泌に関与する役割について把握する。結果:1.親株Balb/3T3ならびにMO-5株にヒトEGF受容体cDNAを導入過剰発現させたBNER4およびMNER23株を各々樹立した。ポリオーマウィルスmiddeT抗原やウィルスsrcオンコジンを導入した所BNER4では外来性のEGF添加によって著明にdown調節が阻害される時に,MNER23株においては全く阻害をうけないことが観察された。膜EGF受容体とウィルス成合との相互的な反応性がモネンシン耐性変異によって影響をうけている可能性を示唆した。2.親株KB由来のKB/BFA-1株においてはゴルジ体の構造が特異的に変化していた。さらにゴルジ認識のβ-COPやその他の特異蛋白がゴルジ由来と推察される小胞への局在が変異株で多数観察された。またゴルジ体の膜蛋白の成熟や分泌がブレフェルジンによって親株に較べて阻害をうけにくくなっていた。ゴルジを中心とする機能が薬剤に対して耐性変異をうけていることが示唆された。

目的：高尔基亚地区细胞的巧妙分类是一个奇迹。为了了解分类的机制，我们想阐明使用哺乳动物细胞中的遗传突变体在哺乳动物细胞中停止或改变分类转运的流动的运输机制。为此，我们决定对针对高尔基体的两个抗性基因突变体以及针对Brefeldin A的独立分离的遗传突变体进行以下研究。1。从小鼠BALB/3T3中选择用于Monensin耐药性的MO-5菌株在表皮生长因子（EGF）和病毒掺入中缺乏。我们研究了EGF信号反应对EGF受体中细胞增殖的分子机制。 2。我们最近从选择用于Brefeldin耐药的人KB细胞中成功地分离了Kb/bfa-1菌株，并观察到高尔基体形态的变化，因此我们将使用这种菌株来了解高尔基体细胞分泌所涉及的作用。结果：1。BNER4和MNER23菌株分别用人EGF受体BALB/3T3和MO-5菌株中的人EGF受体cDNA过表达。当引入多瘤病毒MIDDET抗原和病毒SRC oncodin时，观察到，当添加外源性EGF会显着抑制下降调节时，在MNER23菌株中未观察到抑制作用。这表明膜EGF受体与病毒构象之间的相互反应性可能受到Monensin耐药性突变的影响。 2。在源自母菌株Kb的Kb/bfa-1菌株中，高尔基体的结构被特异性改变。此外，在突变株中观察到高尔基体认识的β-cop和其他特定蛋白的许多定位在囊泡中，在突变株中观察到了。此外，高尔基膜蛋白的成熟和分泌比在母菌株中抑制Brefeldin的可能性少。有人提出，以高尔基体为中心的功能会受到药物的耐药性突变。