ゴルジ体の遺伝変異と選別輸送の機構

高尔基体的遗传变异和选择性运输机制

基本信息

批准号：
05252227
负责人：
桑野信彦
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々の研究実績は以下の通りである。(1)EGF受容体のmRNAは存在するが、膜表層上の発現が著明に減少しているマウス由来のモネンシン耐性株は、srcやポリオーマmiddleT抗原による形質転換がおこらない。この変異株にヒトEGF受容体cDNAを導入し発現株を単離した。ポリオーマウイルスのmoddleT抗原の導入によってBalb/3T3細胞膜局在のヒトEGF受容体のdown regulationは著明に阻害されるが、モネンシン耐性細胞のヒトEGF受容体のdown regulationはこのポリオーマ遺伝子によって影響をうけなかった。EGF受容体が細胞膜表層付近でこのウイルス遺伝子産物と緊密に関連していることをはじめて示唆した。(2)ブレフェルジンAについては、LDL受容体の細胞内輸送を変化させること及び、ゴルジ体におけるシアル酸付加反応の場がLDLとEGFの受容体で明らかに異なっていることを観察した。そこで我々は、ヒト癌KB細胞より安定なブレフェルジンA耐性株を単離し、ゴルジ体の形態学的変化を観察した。植物毒素であるリシンの細胞毒性はKB細胞ではブレフェルジンAによって回復するが耐性では回復しなかった。他方、ジフテリア毒素の細胞毒性は、KB及びジフテリア毒素の細胞内輸送経路が異なることを示唆している。(3)ゴルジ体におけるLDL受容体のO_-糖鎖不全をひきおこしたハムスター由来のモネンシン及びコンパクチン耐性変異株は、両者ともゴルジ体の変化が示唆されるが、同一相補性グループに属し、O_-糖鎖伸長に関与するN_-アセチルガラクトサミン転移酵素の活性が約2/3に低下し、さらにLDL受容体に局在する20本近いO_-糖鎖のうち、LDL結合部位近傍に存在する約1/3が欠失していた。LDL受容体成熟の新しいゴルジ体変異であることを示した。(4)現在、Balb/3T3細胞のモネンシン耐性変異株から遺伝子subtractionを用いて耐性変異細胞で特異的に発現している遺伝子を単離する仕事を開始している。さらにEGF受容体の抵抗を用いて免疫電顕の仕事がうまく進んでいる状況下である。

我们的研究结果如下：（1）尽管存在EGF受体的mRNA，但来自小鼠的莫妮素抗菌菌株的mRNA在膜表面的表达显着降低，不会被SRC或Polyoma Middet抗原转化。将人EGF受体cDNA引入该突变株中，以分离表达的菌株。多瘤病毒ModDLET抗原的引入显着抑制了位于BALB/3T3细胞膜的人EGF受体的下降调节，但是该多体瘤基因不影响人类EGF受体的下降调节。这表明EGF受体与细胞膜表面附近的该病毒基因产物密切相关。（2）对于Brefeldin A，我们观察到LDL受体的细胞内转运改变，而高尔基体中的唾液酸添加反应在LDL和EGF受体之间明显不同。因此，我们分离了一种比人类癌KB细胞更稳定的Brefeldin A抗性菌株，并观察到高尔基体的形态变化。 Brefeldin A在KB细胞中恢复了植物毒素赖氨酸的细胞毒性，但不具有耐药性。另一方面，白喉毒素的细胞毒性表明，Kb和白喉毒素的细胞内转运途径有所不同。 (3) Both monensin and compactin-resistant mutants derived from hamsters that caused O_-glycosylated deficiency of the LDL receptor in the Golgi body suggest that changes in the Golgi body, but the activity of N_-acetylgalactosamine transferase belonging to the same complementary group and involved in O_-glycosylated extension was reduced by about 2/3, and of the nearly 20 O_-糖基化位于LDL受体，删除了约1/3的LDL结合位点。它已被证明是LDL受体成熟的新高尔基突变。（4）目前，我们已经开始使用基因减法分离出在BALB/3T3细胞中抗性突变细胞中特异性表达的基因。此外，使用EGF受体的抗性，免疫电子显微镜的工作正在很好地进行。