真核細胞のDNA複製開始機構に関する研究

真核细胞DNA复制启动机制的研究

基本信息

批准号：
07680763
负责人：
室伏擴
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07680763/
关键词：
Xenopus卵 DNA複製 DNA複製開始因子 DNA untwisting因子 DNAヘリカーゼ HMGタンパク質

项目摘要

DNA Untwisting/Unwinding Factor (DUF)は、DNA複製開始に関与する因子として、筆者らによってXenopus卵抽出液から単離された。この因子は、140kDaと96kDaの2種のサブユニットからなり、DNAを負にねじる活性(untwisting活性)とDNAを巻き戻す活性(unwinding活性)を有し、二重鎖DNAを開いて、DNAポリメラーゼα-プライマーゼによるDNA合成を誘起する活性を持つことをすでに見いだしている。本研究では、Xenopus Oocyte cDNAライブラリーからクローニングを行い、96kDaサブユニット(以下、DUF96)の全長、および140kDaサブユニット(以下DUF140)の約90%のアミノ酸配列を決定した。(1)DUF96:DUF96のC-末端付近には、HMG1,2タンパク質のDNA結合ドメイン(HMGボックス)と類似のアミノ酸配列が存在し、かつ、その両側に塩基性アミノ酸残基に富む部分が存在することがわかった。ホモロジー検索から、DUF96はマウスT160(V(D)J組換えのシグナル配列に結合する因子)およびヒトSSRP1(抗癌剤シスプラチン付加によって湾曲したDNAに結合する因子)と高い類似性を有することがわかった。(2)DUF140:DUF140のN-末端近くにはDNAヘリカーゼモチーフが存在し、C-末端近傍には酸性アミノ酸配列に富む部分、および核移行シグナルと考えられる塩基性アミノ酸に富む部分が存在することが分かった。以上の結果から、DUFのuntwisting活性は主としてDUF96に(DUF96と類似の構造を持つHMG1にはDNA untwisting活性が見いだされている)、unwinding活性は主としてDUF140によって担われている可能性が高いと思われる。

作者从非洲爪蟾卵提取物中分离出 DNA 解旋/解旋因子 (DUF)，作为参与 DNA 复制启动的因子。该因子由140kDa和96kDa两个亚基组成，具有DNA负向扭转活性(untwistingactivity)和DNA解旋活性(unwindingactivity)，并打开双链DNA，使DNA聚合酶能够具有通过α-引物酶诱导DNA合成的活性。在本研究中，我们从爪蟾卵母细胞cDNA文库中进行克隆，并确定了96kDa亚基（以下简称DUF96）和约90%的140kDa亚基（以下简称DUF140）的全长氨基酸序列。 (1)DUF96：在DUF96的C末端附近有一段与HMG1,2蛋白的DNA结合域(HMG box)相似的氨基酸序列，两侧有富含碱性氨基酸残基的部分。我发现确实如此。同源性搜索显示，DUF96 与小鼠 T160（与 V(D)J 重组信号序列结合的因子）和人 SSRP1（与添加抗癌药物顺铂而弯曲的 DNA 结合的因子）具有高度相似性。 (2)DUF140：DUF140的N末端附近存在DNA解旋酶基序，C末端附近存在被认为是核输入信号的富含酸性氨基酸的区域和富含碱性氨基酸的区域。我明白。从以上结果来看，DUF的解旋活性很可能主要由DUF96承担（在HMG1中已发现DNA解旋活性，其结构与DUF96相似），而解旋活性主要由DUF140承担。完成了。